먹는물水質公定試驗方法

環境部 告示 第1997-118號('97.12.22 制定)
第1999-16號('99. 2.11 改定)
第2000-75號(2000. 7.1 改定
)


   

 

2000. 7 . 1

 

 

 

 

 

차 례

제1장 총칙
제2장 시료의 채취와 보존
제3장 검사항목별 시험방법

1. 미생물
1-1. 저온일반세균
1-2. (중온)일반세균
제1법(수돗물등)
제2법(샘물 및 먹는샘물)
1-3. 대장균군
제1법(시험관법 : 수돗물 등)
제2법(시험관법 : 샘물 및 먹는샘물)
제3법(막여과법 : 샘물 및 먹는샘물)
1-4. 분원성연쇄상구균
1-5. 녹농균
1-6. 아황산환원혐기성포자형성균
1-7. 살모넬라
제1법(시험관법)
제2법(막여과법)
1-8. 쉬겔라
제1법(시험관법)
제2법(막여과법)
1-9. 여시니아

2. 이화학적 시험

2-1. 일반시험
2-1-1. 경도
2-1-2. 과망간산칼륨소비량
2-1-3. 냄새
2-1-4. 맛
2-1-5. 색도
2-1-6. 수소이온농도
2-1-7. 증발잔류물
2-1-8. 탁도

2-2. 무기물질
2-2-1. 이온류
2-2-1-1. 불소
2-2-1-2. 시안
2-2-1-3. 암모니아성질소
2-2-1-4. 질산성질소
2-2-1-5. 염소이온
2-2-1-6. 황산이온
2-2-2. 금속류
2-2-2-1. 납
2-2-2-2. 비소
2-2-2-3. 세레늄
2-2-2-4. 수은
2-2-2-5. 6가크롬
2-2-2-6. 카드뮴
2-2-2-7. 동
2-2-2-8. 아연
2-2-2-9. 철
2-2-2-10. 망간
2-2-2-11. 알루미늄
제1법(옥신법)
제2법(원자흡광광도법)
2-2-2-12보론(B)
제1법(유도결합플라즈마-원자방출분광법 )
제2법(흡광광도법)


제 1 장 총 칙

Ⅰ. 목적

이 시험방법은 먹는물관리법 제5조의2(먹는물수질공정시험방법) 규정에 의거 먹는물수질기준및검사등에관한규칙 제2조(수질기준 및 검사방법)의 규정에 의한 먹는물 수질기준 항목등에 대한 수질검사를 실시함에 있어서 정확과 통일을 기하기 위해 필요한 제반사항에 대하여 규정함을 목적으로 한다.

Ⅱ. 적용범위

이 시험방법은 먹는물수질기준및검사등에관한규칙 제2조의 규정에 의한 먹는물의 수질기준에 적합한지 여부를 시험·판정하는데 적용한다.

Ⅲ. 총칙

이 시험방법은 특별히 규정을 하는 것 이외에는 이하의 총칙에 따른다.

1. 도량형은 미터법에 따라 다음의 약호를 쓴다.
길이 : m, cm, mm, μm, nm
용량 : ㎘, ℓ, ㎖, ㎕
중량 : kg, g, mg, μg, ng
넓이 : ㎡, ㎠, ㎟
부피 : ㎥, ㎤, ㎣
1ℓ는 1,000cc, 1㎖는 1cc로 하여 시험을 할 수 있다.

2. 농도를 표시할 때에는 다음의 기호를 쓴다.
(가) 백분율을 표시할 때에는 %의 기호를 쓴다. 다만, 용액 100㎖중의 물질함량(g)을 표시할 때에는 w/v%, 용액 100㎖중의 물질함량(㎖)을 표시할 때에는 v/v%의 기호를 쓴다.
(나) 백만분율을 표시할 때에는 mg/ℓ 또는 ppm의 기호를 쓴다.
(다) 십억분율을 표시할 때에는 ㎍/ℓ 또는 ppb의 기호를 쓴다.
3. 온도는 셀시우스법을 쓰며, 아라비아숫자의 오른쪽에 ℃를 붙여서 표시한다.

4. 표준온도는 20℃로 하고, 상온은 15∼25℃, 실온은 1∼35℃, 미온은 30∼40℃로 한다. 온탕은 따로 규정이 없는 한 60∼70℃, 열탕은 100℃의 물로 한다. "수욕상 또는 수욕중에서 가열한다"함은 따로 규정이 없는 한 그 가열온도는 약 100℃로 하되, 수욕 대신 약 100℃의 증기욕을 쓸 수 있다.
5. 찬 곳이라 함은 따로 규정이 없는 한 0∼15℃의 장소를 말한다.
6. 시험에 쓰는 물은 따로 규정이 없는 한 증류수 또는 정제수로 한다.
7. 용액이라고 기재하고 특히, 그 용제를 표시하지 아니한 것은 수용액을 말한다.
8. 감압은 따로 규정이 없는 한 15mmHg이하로 한다.
9. 미산성, 약산성, 강산성, 미알칼리성, 약알칼리성, 강알칼리성 등으로 기재한 것은 산성 또는 알칼리성의 정도의 개략을 표시한 것으로서 그 pH의 범위는 다음과 같다.
미산성 : 약 5 ∼ 6.5
약산성 : 약 3 ∼ 5
강산성 : 약 3이하
중 성 : 약 6.5 ∼ 7.5
미알칼리성 : 약 7.5 ∼ 9
약알칼리성 : 약 9 ∼ 11
강알칼리성 : 약 11이상
10. 용액의 농도를 (1→5), (1→10), (1→100)등으로 기재한 것은 고체약품 1g 또는 액체약품 1㎖를 용제에 녹여 전량을 각각 5㎖, 10㎖, 100㎖ 등으로 하는 것을 표시한다. 또한 (1+1), (1+5)등으로 기재한 것은 액체약품 1㎖에 물을 각각 1㎖, 5㎖ 혼합하는 것으로서 뒤의 숫자로서 물의 비율을 나타낸다.
11. (1:1), (4:2:1) 등은 고체약품 혼합중량비 또는 액체약품 혼합용량비를 말한다.
12. 방울수를 측정할 때에는 20℃에서 물 20방울을 적하할 때 그 무게가 0.9∼1.1g이 되는 기구를 쓴다.
13. 네슬러관은 안지름 20mm, 바깥지름 24mm, 밑에서부터 마개 밑까지의 거리가 20cm인 무색유리로 만든 마개있는 밑면이 평평한 시험관으로서 50㎖의 것을 사용한다. 또한 각 관의 눈금높이의 차는 2mm이하로 한다.
14. 원자량은 국제원자량표에 의하며, 분자량은 이 표에 의하여 계산한 후 소수점 이하 둘째자리까지 정리한다.

15. 이상, 이하 또는 미만이라고 기재한 것은 시험에서 얻은 수치를 끊어 올리거나 버리지 않고 이상, 이하 또는 미만을 표시한 것이며 "a∼b"라고 기재한 것은 a 이상 b이하를 표시한 것이다.
16. "정밀히 단다"라 함은 규정된 양의 검체를 취하여 화학천칭 또는 자동미량천칭으로 칭량함을 말한다. 또한 무게를 "정확히 단다"라 함은 규정된 수치의 무게를 2자리수까지 다는 것을 말한다.
17. "약"이라 함은 기재된 양에 대하여 ±10%이상의 차가 있어서는 안된다.
18. 시험은 따로 규정이 없는 한 상온에서 하고 조작 후 30초 이내에 관찰한다. 다만, 온도의 영향이 있는 것에 대하여는 표준온도에서 한다.
19. "항량으로 될 때까지 건조한다" 또는 "항량으로 될 때까지 강열한다"라 함은 같은 조건에서 1시간 더 건조하거나 또는 강열할 때 전후 차가 g당 0.3mg이하일 때를 말한다.
20. 수치를 정리하여 소수점 이하를 n자리까지 하는 경우에는 (n+1)자리 이하의 수치를 다음과 같이 끊어 올리거나 또는 버린다.
가. (n+1) 자리의 수가 6이상일 때에는 끊어 올린다.
나. (n+1) 자리의 수가 4이하일 때에는 버린다 .
다. (n+1) 자리의 수가 5일 때에는 n자리의 수가 1, 3, 5, 7 또는 9일 경우에는 끊어 올리고 , n자리의 수가 0, 2, 4, 6 또는 8일 경우에는 버린다.
21. 이 공정시험방법 이외의 방법으로서 그 시험방법이 보다 더 정밀하다고 인정될 때에는 그 방법을 사용할 수도 있다.


제2장 시료의 채취와 보존

1. 암모니아성질소, 질산성질소, 염소이온, 과망간산칼륨소비량, 불소, 6가크롬, 페놀, 경도, 황산이온, 세제, 수소이온농도, 색도, 탁도, 증발잔류물, 농약 및 잔류염소시험용 시료 : 미리 질산 및 증류수로 씻은 유리병에 시료를 채취하여 신속히 시험한다. 다만, 불소는 폴리에틸렌병에 채취하여 1주일이내에 시험하고, 페놀은 4시간 이내에 시험하지 못할 때에는 시료 1ℓ에 대하여 황산동(5수염) 1g과 인산을 넣어 pH를 약 4로 하고, 냉암소에 보존하여 24시간이내에 시험하며 잔류염소를 함유한 때에는 아비산나트륨용액을 넣어 잔류염소를 제거한다.

2. 일반세균 및 대장균군 시험용 시료
건열멸균한(잔류염소를 함유한 시료를 채취하는 경우에는 미리 시료 100㎖에 대하여 치오황산나트륨분말 0.02∼0.05g을 넣고 121℃에서 고압멸균한다) 마개있는 유리병에 시료를 채취하고 신속히 시험한다. 신속히 시험할 수 없는 경우에는 10℃이하의 차고 어두운 곳에 보존하고 12시간 이내에 시험한다.

3. 시안시험용 시료
미리 증류수로 잘 씻은 유리병 또는 폴리에틸렌병에 시료를 채취하고 곧 입상의 수산화나트륨을 넣어 pH 12이상의 알칼리성으로 하고 신속히 시험한다. 다만, 잔류염소를 함유한 경우에는 채취 후 곧 아비산나트륨용액을 넣어 잔류염소를 제거한다.

4. 트리할로메탄 및 휘발성유기화학물질 시험용시료
미리 증류수로 잘 씻은 유리병에 기포가 생기지 아니하도록 조용히 채취하고 pH가 약 2가 되도록 인산(1+10)을 시료 10㎖당 1방울을 넣고 물을 추가하여 꽉 채운 후 밀봉한다. 잔류염소가 함유되어 있는 경우에는 아비산나트륨용액을 넣어 잔류염소를 제거한다.


제 3 장 검사항목별 시험방법

1. 미생물

1-1. 저온일반세균(Psychrophilic bacteria)

가. 배지
(1) R2A배지

나. 희석액
(1) 인산완충희석액
인산2수소칼륨 34g을 500ml의 물에 녹인 후 수산화나트륨용액(0.5N)으로 실온에서 pH를 7.2±0.2로 조정한 후 물를 넣어 1ℓ가 되도록 만들어 이를 보존용원액으로 한다. 이 보존용원액 1.25ml와 염화마그네슘(6수염) 81.1g을 물 1ℓ에 녹여 만든 염화마그네슘용액 5.0ml를 넣은 다음 물로 1ℓ가 되도록 하여 인산완충희석액을 만든다. 인산완충희석액은 99±2ml 또는 9±0.2ml 되도록 나선식 마개가 있는 희석병이나 시험관에 나누어 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

(2) 펩톤희석액
물에 10%펩톤 용액을 넣어 펩톤의 최종 농도가 0.1%가 되도록 희석하고, 실온에서 pH가 6.8±0.2가 되도록 조정한 다음 99±2ml 또는 9±0.2ml 되도록 나선식 마개가 있는 희석병이나 시험관에 나누어 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

다. 기구 및 장치
(1) 피펫 또는 자동 피펫
용량 1∼5ml의 메스피펫이나 자동피펫(플라스틱팁 포함)으로 멸균된 것을 사용한다.
(2) 페트리접시
지름 약 9cm, 높이 약 1.5cm의 유리제품(65cm2) 또는 1회용 플라스틱 제품(57cm2)으로 멸균된 것을 사용한다.
(3) 항온 수욕조
수온을 45±0.5℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.
(4) 배양기
배양온도를 21±1.0℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.
(5) 집락계수기
확대경과 조명장치가 부착되어 있고 집락을 계수하기 좋도록 페트리접시를 놓는 판에 1cm2로 구획이 그려진 것을 사용한다.

라. 시험

(1) 검액의 조제와 시험
(가) 먹는샘물의 원수는 시료를 채취하여 즉시 분석을 시작하여야 한다. 다만 그렇지 못할 경우 시료 채취 후 바로 4℃ 이하에서 얼지 않도록 냉장 보관하며 이 경우라도 30시간 이내에 분석을 시작하여야 한다. 먹는샘물의 제품수는 병입 후 즉시 채취하여 4℃ 이하에서 얼지 않도록 냉장 보관하여야 하며 이 경우라도 12시간 이내에 분석을 시작하여야 한다. 12시간 이내에 분석을 시작하지 못할 경우에는 제품수의 일반세균은 실험하지 아니한다.
(나) 검수를 인산완충희석액 또는 펩톤희석액을 사용하여 10단계 희석법으로 적당한 농도(1ml당 세균수가 30∼300개로 추정될 수 있는 농도)로 희석하고 각 단계 희석액 1ml 씩을 멸균된 각 페트리접시 2매 이상에 넣는다.
(다) 미리 멸균시켜 45±0.5℃로 유지시킨 R2A배지 10∼12ml씩을 각각 검액이 들어 있는 페트리접시에 무균적으로 나누어 넣고 배지와 검수가 잘 혼합되도록 좌우로 회전한다.
(라) 배지가 응고되면 21±1.0℃에서 72±3시간 배양하여 형성된 집락의 수를 계산한다.
(마) 대조군시험으로 멸균된 희석액을 상기 방법과 동일하게 실험하여 대조군으로 한다.
(바) 검수의 희석 조작부터 평판용 배지를 페트리접시에 나누어 넣을 때까지의 조작시간은 20분을 초과하지 않아야 한다.

(2) 세균집락수의 계산

(가) 배양 후 즉시 집락계수기를 이용하여 확산집락이 없고 1평판 당 30∼300개의 집락을 형성한 평판을 택하여 집락을 계수하는 것을 원칙으로 한다.
(나) 평판마다 300개 이상의 집락이 형성되었을 때에는 가장 대표적인 평판을 택하여 밀집평판측정법에 따라 집락수를 계산한다. 계산방법은 안지름 9cm의 유리 페트리접시를 사용한 경우에는 1cm2내의 집락수를 13군데에서 계수하여 평균한 집락수에 65를 곱하고, 1회용 플라스틱 페트리접시를 사용한 경우에는 57을 곱한다.
(다) 평판마다 30개 이하의 집락이 형성되었을 때에는 원액을 접종한 평판의 집락을 계수하여 평균하며 기재는 반드시 ml중 몇 CFU라고 한다.
(라) 30∼300개의 집락을 가지는 평판이 없고 300개 이상의 집락을 가지는 평판이 1개 이상 존재하는 경우 300개에 가장 가까운 평판의 집락을 계수한다.
(마) 계산 방법은 해당 희석배수에 사용된 각 평판 내의 집락수를 측정하여 합한 다음 사용한 평판수로 나누어 평판당 평균집락수를 구하여 여기에 해당 희석배수를 곱한 수치를 저온일반세균수로 하며, ml중 몇 CFU라고 기재한다. 모든 계수 과정에서는 저온일반세균수가 100이상일때는 높은단위 숫자로부터 3단계이하는 사사오입하여 유효숫자를 2단계로 끊어 그 이하를 0으로 한 수치를 1㎖중의 저온일반세균수로 하고 저온일반세균수가 100미만일때에는 소숫점이하는 버린 수치를 1㎖중의 저온일반세균수로 기재한다.

1-2. (중온)일반세균(Mesophilic bacteria)

[제 1 법] : 수돗물, 약수터 등의 먹는물 수질검사에 적용한다.

가. 배지
(1) 표준한천배지(플레이트카운트 한천배지)
트립톤 5.0g
효모엑스 2.5g
포도당 1.0g
한천 15.0g
물 1.0ℓ
물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 7.0±0.2가 되도록 조정한 다음 적어도 10∼12㎖씩 시험관에 넣고 121℃에서 15분간 고압증기멸균 한다.

(2) 트립톤 포도당 엑스 한천배지
소고기 엑스 3.0g
트립톤 5.0g
포도당 1.0g
한천 15.0g
물 1.0ℓ
물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 7.0±0.2가 되도록 조정한 다음 적어도 10∼12㎖씩 시험관에 넣고 121℃에서 15분간 고압증기멸균 한다.

나. 희석액
(1) 인산완충희석액
인산2수소칼륨 34g를 500㎖의 물에 녹인 후 수산화나트륨용액(0.5N)으로 실온에서 pH를 7.2±0.2로 조정한 후 물을 넣어 1ℓ가 되도록 만들어 이를 보존용 원액으로 한다. 이 보존용 원액 1.25㎖와 염화마그네슘(6수염) 81.1g을 물 1ℓ에 녹여 만든 염화마그네슘용액 5.0㎖를 넣은 다음 물로 1ℓ가 되도록 하여 인산완충희석액을 만든다. 인산완충희석액은 99±2㎖ 또는 9±2㎖ 되도록 나선식 마개가 있는 희석병이나 시험관에 나누어 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다.

(2) 펩톤희석액
물에 10% 펩톤용액을 넣어 펩톤의 최종 농도가 0.1%가 되도록 희석하고, 실온에서 pH가 6.8±0.2가 되도록 조정한 다음 99±2㎖ 또는 9±0.2㎖ 되도록 나선식 마개가 있는 희석병이나 시험관에 나누어 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다.

다. 기구 및 장치
(1) 피펫 또는 자동피펫
용량 1∼5㎖의 메스피펫이나 자동피펫(플라스틱팁 포함)으로 멸균된 것을 사용한다.
(2) 페트리접시
지름 약 9㎝, 높이 1.5㎝의 유리제품(65㎠) 또는 1회용 플라스틱(57㎠)으로 멸균된 것을 사용한다.
(3) 항온 수욕조
수온을 45±0.5℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.
(4) 배양기
배양온도를 35±0.5℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.

(5) 집락계수기
확대경과 조명장치가 부착되고 있고 집락을 계수하기 좋도록 페트리접시를 놓는 판에 1㎠로 구획이 그려진 것을 사용한다.

라. 시험
(1) 검액의 조제와 시험
(가) 검수를 인산완충액 또는 펩톤 희석액을 사용하여 10단계 희석법으로 적당한 농도(1㎖당 세균수가 30∼300개로 추정될 수 있는 농도)로 희석하고, 각 단계 희석액 1㎖씩을 각 페트리접시 2매 이상에 넣는다.
(나) 미리 멸균시켜 45±0.5℃로 유지시킨 표준 한천배지 또는 트립톤 포도당엑스 한천배지를 적어도 10∼12㎖씩을 각각 검액이 들어있는 페트리접시에 무균적으로 나누어 넣고 배지와 검수가 잘 혼합되도록 좌우로 회전한다.
(다) 35±0.5℃에서 48±2시간 배양하여 형성된 집락의 수를 계산한다.
(라) 대조군 시험으로 멸균된 희석액을 상기 방법과 동일하게 실험하여 대조군으로 한다.
(마) 검수의 희석조작부터 평판용배지를 페트리접시에 나누어 넣을 때까지 조작시간을 20분은 초과하지 않아야 한다.

(2) 세균집락수의 계산

(가) 배양 후 즉시 집락계산기를 이용하여 확산집락이 없고 1평판당 30∼300개의 집락을 형성한 평판을 택하여 집락수를 측정하는 것을 원칙으로 한다.
(나) 평판마다 300개 이상의 집락이 형성되었을 때에는 가장 대표적인 평판을 택하여 밀집평판측정법에 따라 집락수를 계산한다. 계산방법은 안지름 9㎝의 유리페트리접시를 사용한 경우에는 1㎠내의 집락수를 13군데에서 계수하여 평균한 집락수에 65를 곱하고 1회용 플라스틱 페트리접시를 사용한 경우에는 57을 곱한다.
(다) 평판마다 30개 이하의 집락이 형성되었을 때에는 원액을 접종한 평판의 집락을 계수하여 평균하며 기재는 반드시 ㎖중 몇 CFU라고 한다.
(라) 30∼300개의 집락을 가지는 평판이 없고 300개 이상의 집락을 가지는 평판이 1개 이상 존재하는 경우 300개에 가장 가까운 평판의 집락을 계수한다.
(마) 계산방법은 해당 희석배수에 사용된 각 평판내의 집락수를 측정하여 합한 다음 사용한 평판수로 나누어 평판당 평균집락수를 구하여 여기에 해당 희석배수를 곱한 수치를 일반세균수가 100이상일 때에는 높은 단위숫자로 부터 3단계이하는 사사오입하여 유효숫자를 2단계로 끊어 그 이하를 0으로 한 수치를 1㎖중의 일반세균수로 하고, 일반세균수가 100미만일 때에는 소수점 이하는 버린 수치를 1㎖중의 일반세균수로 기재한다.


[제 2 법] : 샘물(원수) 및 먹는샘물(제품수)의 수질검사에 적용한다.

가. 배지
(1) 표준 한천배지

물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 7.0±0.2가 되도록 조정한 다음 10∼12 ml 씩 시험관에 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

(2) 트립톤 포도당 엑스 한천배지

물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 7.0±0.2가 되도록 조정한 다음 10∼12 ml 씩 시험관에 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

나. 희석액

(1) 인산완충희석액
저온일반세균 검사방법과 동일함.
(2) 펩톤희석액
저온일반세균 검사방법과 동일함.

다. 기구 및 장치

(1) 피펫
저온일반세균시험항에서와 같은 것을 사용한다.
(2) 페트리접시
저온일반세균시험항에서와 같은 것을 사용한다.
(3) 항온 수욕조
저온일반세균시험항에서와 같은 것을 사용한다.
(4) 배양기
저온일반세균시험항에서와 같은 것을 사용한다.
(5) 집락계수기
저온일반세균시험항에서와 같은 것을 사용한다.

라. 시험방법

(1) 검액의 조제와 시험
저온일반세균 검사방법과 동일하며 다만 사용하는 배지는 플레이트 카운트 한천배지 또는 트립톤 포도당 엑스 한천배지를 사용한다. 또한, 배양온도와 배양시간은 각각 35±0.5℃와 24±2시간으로 한다.

(2) 세균집락수의 계산
저온일반세균 검사방법과 동일함.


1-3. 대장균군(Total Coliforms)

[제 1 법] : 수돗물, 약수터 등의 먹는물 수질검사에 적용한다.

가. 배지

(1) 2배농후 젖당 배지(추정시험용 배지)
소고기엑스 6.0g
펩톤 10.0g
젖당 10.0g
물 1.0ℓ
물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 6.9±0.2가 되도록 조정한 다음 다람발효관이 들어있는 대시험관에 25㎖씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다.
(2) 젖당 배지(완전시험용 배지)
소고기엑스 3.0g
펩톤 5.0g
젖당 5.0g
물 1.0ℓ
물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 6.9±0.2가 되도록 조정한 다음 다람발효관이 들어있는 소시험관에 10㎖씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다.
(3) 2배 농후 라우릴 트립토스 배지(추정시험용 배지)
황산라우린산나트륨 0.2g
트립토스 40.0g
인산1수소칼륨 10.0g
인산2수소칼륨 5.5g
염화나트륨 10.0g
물 1.0ℓ

물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 6.8±0.2가 되도록 조정한 다음 다람발효관이 들어있는 대시험관에 25㎖씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다.

(4) 라우릴 트립토스 배지(완전시험용 배지)
황산라우린산나트륨 0.1g
트립토스 20.0g
젖당 5.0g
인산1수소칼륨 2.75g
인산2수소칼륨 2.75g
염화나트륨 5.0g
물 1.0ℓ
물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 6.8±0.2가 되도록 조정한 다음 다람발효관이 들어있는 대시험관에 25㎖씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다.
(5) BGLB(Brilliant Green Lactose Bile)배지(확정시험용 배지)
소담즙물 20.0g
펩톤 10.0g
젖당 10.0g
브릴리안트그린 0.0133g
물 1.0ℓ
물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 7.2±0.2가 되도록 조정한 다음 다람발효관이 들어있는 소시험관에 10㎖씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다.

(6) EMB(Eosin Methylene Blue) 한천배지(완전시험용배지)
펩톤 10.0g
젖당 10.0g
인산1수소칼륨 2.0g
한천 15.0g
에오신Y 0.4g
메칠렌블루 0.065g
물 1.0ℓ
물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 7.3±0.2가 되도록 조정한 다음 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한 후, 멸균된 페트리접시에 약 15㎖씩 무균적으로 나누어 넣고 실온에서 가만히 두어 응고시킨다.

(7) 엔도배지(완전시험용 배지)
펩톤 10.0g
젖당 10.0g
인산1수소칼륨 3.5g
한천 15.0g
아황산나트륨 2.5g
염기성푹신 0.5g
물 1.0ℓ
물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 7.5±0.2가 되도록 조정한 다음 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한 후, 멸균된 페트리접시에 약 15㎖씩 무균적으로 나누어 넣고 가만히 두어 응고시킨다.

(8) 보통한천 사면배지(완전시험용 배지)
펩톤 5.0g
소고기엑스 3.0g
한천 15.0g
물 1.0ℓ
물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 6.8±0.2가 되도록 조정한 다음 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한 후, 실온에서 시험관을 비스듬히 두어 사면배지로 응고시킨다.

나. 기구 및 장치
(1) 피펫
용량 5∼10㎖의 메스피펫이나 자동피펫(플라스틱피펫팁 포함)으로서 멸균된 것을 사용한다.
(2) 페트리접시
일반세균 검사방법에서 사용하는 것과 같다.
(3) 시험관
소시험관(내경 16㎜, 높이 150㎜), 중시험관(내경 18㎜, 높이 180㎜) 및 2종류 시험관으로 솜(플라스틱이나 금속뚜껑도 사용가능)으로 마개를 할 수 있고 고압증기 멸균할 수 있어야 한다.
(4) 다람발효관
다람발효관(내경 6㎜, 높이 30㎜)으로 멸균된 것을 사용한다.
(5) 백금이
고리의 안지름이 약 3㎜인 백금이를 사용한다.
(6) 배양기
배양온도를 35±0.5℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.

다. 시험

먹는물에 대한 대장균군 시험은 다음 3단계로 시험한다.

(1) 추정시험
(가) 먹는물에 대한 추정시험은 2배 농후의 젖당배지 또는 라우릴트립토스배지가 10㎖씩 들어 있는 중시험관(다람발효관이 들어있는 시험관) 5개에 검수 10㎖씩을 접종하여 35±0.5℃에서 24±2시간 배양한 다음 가스발생이 관찰되면 추정시험 양성으로 판정하고 확정시험을 실시한다.


(나) 배양 24±2시간 경과시 어느 시험관에서도 가스발생을 관찰하지 못한 경우 동일한 조건으로 48±3시간까지 배양하여 여전히 가스발생이 없을 때에는 추정시험 음성으로 판정하고, 하나 이상의 시험관에서 가스발생이 관찰되었을 때에는 확정시험을 실시한다.

(2) 확정시험

(가) 추정시험에서 가스발생이 관찰되었을 때에는 즉시 가스가 발생한 시험관으로부터 배양액을 1백금이씩 취하여 BGLB배지가 10㎖씩 들어있는 시험관(다람발효관이 들어있는 시험관)에 접종시켜 35±0.5℃에서 48±3시간 배양한다.
(나) 이때 가스발생을 관찰할 수 없으면 대장균군 확정시험 음성으로 판정하고 가스발생이 관찰되었을 때에는 완전시험을 실시한다.

(3) 완전시험

(가) 확정시험에서 가스발생이 관찰되었을 때에는 가스가 발생한 확정시험용배지로 부터 배양액을 취하여 즉시 엔도배지 또는 EMB 한천배지 1매 이상에 획선 접종하고 35±0.5℃에서 24±2시간 배양한다.
(나) 엔도배지 또는 EMB 한천배지 위에 생성된 대장균군의 전형적인 집락은 1개 이상을, 비전형적인 집락은 2개 이상을 각각 취하여 젖당배지 또는 라우릴트립토스배지 10㎖씩 들어있는 시험관(다람발효관이 들어있는 시험관)과 보통한천사면배지에 이식한다.
(다) 이식한 액체배지는 35±0.5℃에서 24±2시간 또는 48±3시간 배양하여 가스발생을 확인하고, 가스발생이 없을 때는 다시 24±2시간 배양하여 가스발생을 확인한다. 보통한천사면배지는 35±0.5℃에서 24±2시간 배양한 다음 생성된 집락을 그람염색하여 현미경으로 관찰한다.
(라) 완전시험에서 가스발생을 재확인하고, 현미경 관찰시 그람음성 무아포성간균임이 확인되면 대장균군 양성으로 판정한다.


[제 2 법 : 시험관법] : 샘물(원수) 및 먹는샘물(제품수)의 수질검사에 적용한다.

가. 배지
(1) 3배 농후 젖당배지 (추정시험용 배지)

물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 6.9±0.2가 되도록 조정한 다음 다람시험관이 들어 있는 대시험관에 25ml 씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

(2) 젖당배지 (완전시험용 배지)

물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 6.9±0.2가 되도록 조정한 다음 다람시험관이 들어 있는 소시험관에 10ml 씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

(3) 3배 농후 라우릴 트립토스배지(추정시험용배지)

물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 6.8±0.2가 되도록 조정한 다음 다람시험관이 들어 있는 대시험관에 25ml 씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.


(4) 라우릴 트립토스배지 (완전시험용배지)

물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 6.8±0.2가 되도록 조정한 다음 다람시험관이 들어 있는 소시험관에 10ml 씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

(5) BGLB배지 (확정시험용배지)

물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 7.2±0.2가 되도록 조정한 다음 다람시험관이 들어 있는 소시험관에 10ml 씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

(6) EMB 한천배지 (완전시험용배지)


물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 7.2±0.2가 되도록 조정한 다음 121℃에서 15분간 고압증기멸균한 후, 멸균된 페트리접시에 약 15ml씩 무균적으로 나누어 넣고 실온에서 가만히 두어 응고시킨다.

(7) 엔도배지 (완전시험용배지)

물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 7.5±0.2가 되도록 조정한 다음 121℃에서 15분간 고압증기멸균한 후, 멸균된 페트리접시에 약 15ml씩 무균적으로 나누어 넣고 가만히 두어 응고시킨다.

(8) 보통한천 사면배지 ( 완전시험용배지)

물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열하여 녹인 후, pH가 6.8±0.2가 되도록 조정한 다음 시험관에 약 10ml씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기멸균한 후 실온에서 시험관을 비스듬히 두어 사면배지로 응고시킨다.

나. 기구 및 장치

(1) 피펫
용량 10ml, 25ml 또는 50ml의 메스피펫이나 자동 피펫(플리스틱 피펫팁 포함)으로서 멸균된 것을 사용한다.
(2) 메스실린더
용량 50ml의 메스실린더로 증기멸균이 가능한 것을 사용한다.

(3) 페트리접시
저온일반세균검사방법과 동일함.
(4) 시험관
소시험관(내경 16mm, 높이 150mm), 중시험관(내경 18mm, 높이 180mm) 및 대시험관(내경 32mm, 높이 200mm)의 3종류 시험관으로 솜(플라스틱이나 금속 뚜껑도 사용 가능)으로 마개를 할 수 있고 고압증기멸균할 수 있어야 한다.
(5) 다람시험관
소 및 중 시험관용 다람시험관(내경 6mm, 높이 30mm)과 대시험관용 다람시험관(내경 9mm, 높이 45mm)을 사용한다.
(6) 백금이
고리의 안지름이 약 3mm인 백금이를 사용한다.
(7) 배양기
배양온도를 35±0.5℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.

다. 시험

먹는샘물에 대한 대장균군 시험은 다음 3단계로 시험한다.

검수의 채취 및 조제는 먹는샘물 원수를 시료 채취하여 즉시 분석하는 것을 원칙으로 하며, 다만 그렇지 못할 경우 시료 채취 후 바로 4℃ 이하에서 냉장 보관하며 이 경우라도 48시간 이내에 분석을 시작하여야 한다. 먹는샘물 제품수는 병입 후 유통 중인 것도 대상이 되며 병의 마개를 열지 않은 상태에서는 어느 제품도 검수로 사용할 수 있다. 그러나, 병의 마개가 열린 제품수는 검수로 사용할 수 없다. 이와 같은 검수의 채취 및 조제 요령은 녹농균, 분원성 연쇄상구균, 아황산 환원 혐기성 아포 형성균 검사에도 동일하다.
(1) 추정시험
(가) 먹는샘물에 대한 시험은 3배 농후의 젖당배지 또는 라우릴트립토스배지가 25ml씩 들어 있는 대시험관(다람시험관이 들어 있는 시험관) 5개에 검수 50ml 씩을 접종하여 35±0.5℃에서 24±2시간 배양한 다음 가스 발생이 관찰되면 추정시험 양성으로 판정하고 확정시험을 실시한다.


(나) 배양 24±2시간 경과시 어느 시험관에서도 가스 발생을 관찰하지 못한 경우 동일한 조건으로 48±3시간까지 배양하여 여전히 가스발생이 없을 때에는 추정시험 음성으로 판정하고, 하나 이상의 시험관에서 가스 발생이 관찰되었을 때에는 확정시험을 실시한다.


(2) 확정시험

(가) 추정시험에서 가스발생이 관찰되었을 때에는 즉시 가스가 발생한 시험관으로부터 배양액을 1 백금이씩 취하여 BGLB배지가 10ml씩 들어있는 시험관(다람시험관이 들어 있는 시험관)에 접종시켜 35±0.5℃에서 48시간±3시간 배양한다.
(나) 이때 가스 발생을 관찰할 수 없으면 대장균군 확정시험 음성으로 판정하고 가스발생이 관찰되었을 때에는 완전시험을 실시한다.


(3) 완전시험

(가) 확정시험에서 가스발생이 관찰되었을 때에는 가스가 발생한 확정시험용 배지로부터 배양액을 취하여 즉시 엔도배지 또는 EMB한천배지 1매 이상에 획선 접종하고 35±0.5℃에서 24±2시간 배양한다.
(나) 엔도배지 또는 EMB한천배지위에 생성된 대장균군의 전형적인 집락은 1개 이상을, 비전형적인 집락은 2개 이상을 각각 취하여 젖당배지 또는 라우릴트립토스배지 10ml 씩 들어 있는 시험관(다람시험관이 들어 있는 시험관)과 보통한천 사면배지에 이식한다.
(다) 이식한 액체배지는 35±0.5℃에서 24±2시간 배양하여 가스발생을 확인하고, 가스발생이 없는 때는 다시 24±2시간 배양하여 가스발생을 확인한다. 보통한천 사면배지는 35±0.5℃에서 24±2시간 배양한 다음 생성된 집락을 그람 염색하여 현미경으로 관찰한다.
(라) 완전시험에서 가스발생을 재확인하고, 현미경 관찰시 그람 음성 무아포성 간균임이 확인되면 대장균군 양성으로 판정한다.

[제 3 법 : 막여과법] : 샘물(원수) 및 먹는샘물(제품)의 수질검사에 적용한다.

시료액을 멸균여과막을 통하여 여과시킨 후 막을 M-엔도 평판배지위에서 배양하여 막위에 분리포집된 세균에서 형성된 대장균군의 집락수를 계수한다.

가. 배지
(1) M-엔도배지(막여과법배지)

물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 실온에서 pH가 7.2±0.2가 되도록 조정하여 끓인 후 바로 방냉하여 실온으로 식힌 다음 멸균된 흡수패드에 무균적으로 2㎖씩 흡수시킨다. 배지는 사용할때마다 조제하여 사용하고 필요할때는 2∼8℃ 암소에서 최대 4일까지 보관하여 사용할 수 있다.

나. 막여과장치 및 기구

(1) 여과막
공경 0.20㎛이나 0.45㎛이며 직경 47mm로 막의 한 면에 격자가 그려진 것을 사용한다.
(2) 여과장치
여과막을 끼워서 여과할 수 있게 하는 장치로 고압증기멸균가능한 것을 사용한다.
(3) 원형흡수패드
두꺼운 여지나 스폰지 또는 유리섬유여과막으로 직경 47mm크기의 원형패드를 멸균하여 사용한다.


(4) 핀셑
끝이 뭉툭하고 넓으며 여과막을 집어 올릴 때 여과막을 물리적으로 손상시키지 않는 형태의 것으로 화염멸균 가능한 것을 사용한다.
(5) 기타
기타 시험에 필요한 배양기, 피펫, 시험관, 플라스크 등은 대장균군 항목제2법(시험관법)의 기구 및 장치에서 규정된 것을 사용할 수 있다.

다. 시험

먹는샘물에 대한 대장균군의 막여과법에 의한 시험은 다음과 같이 수행한다.

(1) 장치의 멸균
막 지지대위에 여과막의 격자가 그려진 면을 위로 향하게하여 바르게 끼우고 펀넬을 클램프로 고정한 후 알미늄호일이나 멸균가능한 뚜껑으로 열린 부분을 감싸고 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.
(2) 시료액의 여과
멸균된 여과장치에서 알미늄호일 등을 무균상자안에서 무균적으로 제거한 후 흡인병위에 바르게 끼우고 여과하여 멸균한 물을 소량 여과막에 더하고 서서히 여과하여 여과막을 막지지대에 완전하게 밀착시킨다음 시료액 250㎖를 펀넬에 무균적으로 넣어 여과한다. 여과가 끝난 후 여과된 멸균수를 약 30㎖씩 2∼3회 펀넬에 더하여 세정여과를 마친다.
(3) 배양
여과가 끝나 물방울이 여과막에서 없어지면 바로 여과장치를 분리하고 멸균한 핀셑으로 여과막을 조심히 집어내어 M-엔도배지가 흡수된 원형패드위에 기포가 막과 패드사이에 생기지 않도록 경사지게 내려놓고 기포가 형성되지 않은 것을 확인한 후 35±0.5℃가 유지되는 배양기에 페트리접시를 넣고 24±2시간 정치배양한다. 핀셑을 화염멸균하여 사용할 때는 실온에서 식은 후 여과막을 집도록 한다.

라. 집락수 계수와 계산

배양후 여과막 위에 암적색의 금속광택을 내는 집락을 모두 계수하여 시료 250㎖에 들어있는 대장균군의 수로 계산하고 몇 CFU/250㎖이라고 표시하고 시료 250㎖중에 대장균군이 검출되었다고 판정한다, 암적색의 금속광택을 내는 집락이 발견되지 않으면 시료 250㎖중 대장균군 불검출로 판정한다.

마. 기타
기타 명시되지 않은 사항은 대장균군 항목 제2법(시험관법)의 규정에 준한다.

1-4. 분원성연쇄상구균(Fecal Streptococcus)

가. 배지

(1) 3배 농후 아자이드 포도당배지 (추정시험용배지)

상기 성분을 물 1ℓ에 넣고 가열 용해한 후 실온에서 pH가 7.2±0.2가 되도록 조정한 다음 대시험관에 25ml 씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

(2) 파이자 장구균선택 한천배지 (확정시험용배지)

상기 성분을 물 1ℓ에 넣고 가열 용해하여 실온에서 pH가 7.1±0.2가 되도록 조정한 다음 121℃에서 15분간 고압증기멸균한 후 50∼55℃까지 식힌 후 멸균된 페트리접시에 약 15ml 씩 무균적으로 나누어 넣고 굳혀서 평판배지를 조제한다.

나. 기구 및 장치
기구 및 장치는 대장균군시험과 동일한 것을 사용한다.

다. 시험
먹는샘물에 대한 분원성연쇄상구균 시험은 다음 2단계로 시험한다.

(1) 추정시험
검수 50ml 씩을 5개의 3배 농후 아자이드 포도당배지가 25ml씩 들어있는 대시험관에 접종시킨 다음 35±0.5℃에서 24±2시간 배양하여 혼탁이 관찰되지 않을 경우 48±3시간까지 연장하여 배양한다. 배양후 배지의 혼탁 유무를 관찰한다. 어느 시험관에서도 배지가 흐려지지 않는 것은 추정시험 음성으로 하고, 하나 이상의 시험관에서 흐린 것을 확인할 수 있는 것은 세균의 증식, 시료의 혼입에 의한 어느 것이든 관계없이 추정시험 양성으로 판정하고, 다음의 확정시험을 실시한다.

(2) 확정시험
추정시험에서 흐림을 확인한 모든 시험관으로부터 1백금이씩을 취하여 각각 파이자 장구균 선택 한천배지에 획선이식하여 35±0.5℃에서 24±2시간 배양한다. 배양 후 집락을 관찰하는데 갈색의 테두리가 있는 흑갈색의 집락이 형성되었을 경우 확정시험 양성 즉 분원성 연쇄상구균 양성으로 판정하고 전형적인 집락이 관찰되지 않을 경우 확정시험 음성으로 판정한다.


1-5. 녹농균(Pseudomonas aeruginosa)

가. 배지
(1) 3배 농후 아스파라진배지 (추정시험용배지)

상기 성분을 물 1ℓ에 넣고 가열 용해하여 실온에서 pH가 7.0±0.2가 되도록 조정한 다음 대시험관에 25ml 씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압 증기멸균한다.

(2) 아세트아미드배지 (확정시험용배지)

상기 성분을 물 1ℓ에 넣고 가열 용해하여 실온에서 pH가 7.0±0.2가 되도록 조정한 다음 소시험관에 10ml 씩 나누어 넣고 121℃에서 15분간 고압 증기멸균한다.

(3) 아세트아미드 한천 사면배지 (확정시험용배지)


상기 성분을 물 1ℓ에 넣고 가열 용해하여 pH가 7.0±0.2가 되도록 조정한 다음 중시험관에 약 8ml씩 분주하고, 121℃에서 15분간 고압증기멸균한 후 사면이 형성되게 응고시킨다.

(4) 트립틱 소이 증균배지

상기 성분을 물 1ℓ에 넣고 완전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압증기멸균한 후 멸균된 페트리 접시에 약 15㎖씩 무균적으로 분주한 후 굳힌다.

나. 기구 및 장치

(1) 기구 및 장비는 대장균군시험과 동일한 것을 사용한다. 이밖에도 다음의 기구 및 장치가 필요하다.

(2) 자외선 램프(장파장 365nm조사)

(3) 자외선 방호안경

다. 시험 방법
샘물 및 먹는샘물에 대한 녹농균 시험은 다음 3단계로 실시한다.

(1) 추정시험
검수 50ml씩을 3배 농후 아스파라진배지가 25ml씩 들어 있는 시험관 5개에 각각 접종한다. 검수를 접종한 아스파라진배지는 35±0.5℃에서 24±2시간 배양후 암실에서 자외선 방호안경을 끼고, 자외선램프로 장파장의 자외선(365nm부근)을 조사해서 녹색을 띠는 형광의 유무를 관찰하고, 형광이 발생한 경우 추정시험 양성으로 한다. 다만, 명확한 형광이 확인되지 않는 경우는 배양을 더 지속해서 48±3시간까지 관찰한다. 이때 시험관에서 녹색 형광이 확인되지 않는 것은 녹농균 음성으로 인정한다.
시험관에서 녹색 형광이 인지되는 경우는 추정시험 양성으로서, 녹농균의 존재 여부를 확인하기 위해 다음의 확정시험을 계속해서 실시한다.
※참고 : 녹색 형광이 현저한 경우는 밝은 실내에서 자외선을 조사하지 않아도 육안으로 양성이라는 것을 대략 확인할 수 있다.

(2) 확정시험
추정시험에서 녹색을 띠는 형광을 확인한 모든 시험관에서 바로 백금이를 이용하여 양성 배지의 상층부에서 3회(약 0.1ml) 취하여 각각의 아세트아미드배지 또는 아세트아미드 한천사면배지의 사면에 골고루 이식하여 35±0.5℃로 24∼36시간 배양한다. 배양 후 아세트아마이드 한천사면배지에서도 배지에 현저한 색깔 변화가 없는 경우는 녹농균 음성으로 한다. 그러나, 1개의 시험관이라도 적자색을 나타내는 것은 확정시험 양성으로 판정한다.

(3) 확인시험
확정 양성집락을 순수분리한 후 트립틱 소이 증균배지 혹은 유사배지에서 41.5±0.5℃로 48시간 배양하여 성장여부를 관찰한다. 성장하지 않는 집락은 녹농균 음성으로 판정하고 성장한 집락은 그람음성간균임을 그람염색 후 현미경 관찰로 확인한 후 API 20NE와 같은 상용화된 동정시험 Kit나 VITEK같은 새균동정기를 사용하여 동정하거나 아래에 명시된 생화학적 특징을 검사한다. 생화학적 확인시험에서 녹농균으로 동정되면 녹농균 양성으로 판정한다.

※ 생화학적 특성(다음의 조건을 동시에 만족시켜야 함)

1-6. 아황산환원혐기성포자형성균(Spore Forming Sulfite Reducing Anaerobes)

가. 배지
(1) 2배 농후 DRCM배지

물 1ℓ에 상기 성분을 넣고 가열 용해하여 실온에서 pH가 6.8±0.2가 되도록 조정한 다음 나선식 마개가 있는 중시험관에 10ml 씩 분주해서 121℃에서 15분간 고압 증기멸균한다. 실험 시에는 각각의 시험관에 여과 멸균한 4% 구연산제2철과 7% 아황산나트륨을 같은량 혼합한 액을 각각 0.4ml 넣는다.

나. 기구 및 장치
(1) 기구 및 장치는 대장균군 시험과 동일한 것을 사용한다. 이밖에도 다음의 기구가 필요하다.
(2) 항온수욕조
수온을 75±1.0℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.

다. 시험 방법
먹는샘물에 대한 아황산환원 혐기성포자 형성균시험은 다음 2단계로 시험한다.

(1) 아포형성시험
검수 10ml 씩을 5개의 나선식 마개가 있는 시험관에 무균적으로 넣은 후 수온을 75±1.0℃로 유지한 항온수욕조에 10분간 정치한다. 이때 아포를 형성하지 못하는 균은 모두 사멸하고 아포를 형성할 수 있는 세균만 살게 된다.

(2) 배양 및 아황산 환원력시험
75±1.0℃의 항온수욕조에서 10분간 정치시킨 5개의 나선식 마개가 있는 시험관을 즉시 20℃ 전후로 냉각한 다음 미리 준비한 2배농후 DRCM 배지를 각각 10ml씩 넣는다. 그리고 기포가 생기지 않도록 검수와 배지를 혼합한 후 미리 멸균한 액체파라핀을 2∼3ml 씩 무균적으로 배지 표면에 넣고 마개를 단단히 닫는다. 그리고 35±0.5℃로 48±3시간 배양한다. 배양 후 배지가 검게 변하게 되면 아황산이 환원된 것으로 아황산환원 혐기성포자 형성균 양성으로 판정하며 5개의 시험관 중 1개라도 양성인 경우 검출되었다고 판정한다.

1-7. 살모넬라(Salmonella Typhi)

[제1법 : 시험관법]

가. 배지
(1) 3배 농후 셀레나이트 액체증균배지

위 성분을 1ℓ의 물에 녹여 가열용해 한 후 멸균된 대시힘관에 25㎖씩 무균적으로 넣고 식힌다.

(2) 비스무스 아황산염 선택배지 -추정시험용

위 성분을 물 1ℓ에 넣고 가열 용해한 후 50∼55℃까지 식혀 멸균된 페트리접시에 분주하여 고체화한다. 가열시 끓는 상태가 1∼2분 이상 지속되지 않도록 한다. 조제된 배지는 2∼8℃에서 보관하며 4일이상 저장하지 않는다.

나. 기구 및 장치

(1) 기구 및 장치는 3항의 대장균군 시험에서와 같은 것을 사용한다. 이외에 다음의 기구 및 장치가 필요하다.
(2) 냉장고 (2∼5℃)
(3) 광학현미경
(4) 가스버너 및 알코올램프
(5) 슬라이드 글라스

다. 시험

(1) 추정시험
검수 50ml씩을 3배 농후 셀레나이트 증균배지가 25ml씩 들어있는 시험관 5개에 접종한다. 검수를 접종한 셀레나이트배지는 37℃에서 18∼24시간 배양한다. 배양시간이 지연되면 대장균 등 다른 균이 자라므로 배양시간을 엄수한다. 백금이를 이용하여 모든 시험관에서 증균배지 배양액을

취하여 비스무스 한천 선택배지에 획선 접종한다. 35℃에서 24시간 배양 후 집락을 관찰하고 다시 배양하여 48시간후 재 관찰하여 가장자리에 하얀 테를 두른 검고 반짝이는 집락을 살모넬라 양성으로 추정한다. 전형적인 양성집락이 없고 녹색집락이 생성되었을 경우도 집락을 취하여 확인시험한다.

(2) 확인시험
(가) 생화학적 확인시험: 추정시험에서 양성으로 판정된 집락을 순수 분리하여 선택배지로 옮겨심는다. 그람염색 후 현미경 관찰로 그람 음성, 간균임을 확인하고 API 20E kit와 같은 동정시험 kit나 VITEK 같은 세균동정기를 사용하여 동정하거나, 〔표 1〕에 명시된 생화학적 특징을 검사한다. 생화학적 확인시험으로 살모넬라속으로 동정되면 살모넬라균 양성으로 판정한다. 병원성 및 역학에 대한 정보를 얻기 위하여 더 자세한 종 및 혈청형의 동정을 혈청학적인 시험을 통하여 할 수 있다.

(나) 혈청학적시험: 생화학적시험에서 살모넬라로 동정된 균들은 살모넬라 O항혈청에 해당하는 A, B, C, D, E그룹 항혈청반응을 보아 그룹을 결정하고 그 그룹에 속하는 단일요소 항혈청으로 시험한다. Vi항혈청에만 응집이 있는 경우는 살모넬라 타이피가 아닌가 확인하고, 균 부유액을 100℃에서 끓여 Vi항원을 파괴한 후 O항혈청응집을 보아 그룹을 결정한다. H항혈청으로 편모항원 Phase I, II를 시험한 후 O항원, 편모항원을 종합하여 살모넬라 균종을 확정짓는다(살모넬라 종 즉, species나 serotype을 확인하려면 국립보건원 살모넬라센타에 의뢰하면 최종동정을 확인받을 수 있다).

[제2법 : 막여과법 ]

가. 배지

(1) 셀레나이트 액체증균배지

위 성분을 1ℓ의 물에 녹여 가열용해 한 후 멸균된 대시험관에 25㎖씩 무균적으로 나누어 넣고 마개를 한 후 식힌다. 조제된 배지는 2∼8℃에서 보관한다.

(2) 비스무스 아황산염 배지 - 추정시험용 배지
시험관법의 배지와 동일하다.

나. 기구 및 장치

(1) 기구 및 장치는 대장균군 시험중 막여과법에서와 같은 것을 사용한다. 이외에 다음의 기구가 필요하다.
(2) 멸균용 가위

다. 시험
(1) 추정시험
막여과장치를 설치하여 250ml의 시료를 여과한다. 장치의 멸균 및 시료액의 여과는 대장균군의 막여과법과 동일하게 한다. 여과막은 멸균가위로 잘라서 셀레나이트 증균배지가 7∼10ml 가량 들어있는 시험관에 넣어 37℃에서 18∼24시간 배양한다. 백금이를 이용하여 배양액을 취하여 비스무스 아황산염 선택배지에 획선 접종하여 48시간까지 배양한 후 생성된 집락중 가장자리에 하얀 얇은 테를 두른 검고 반짝이는 콜로니를 살모넬라 추정시험의 양성으로 판정한다. 전형적인 양성집락이 없고 녹색집락이 생성되었을 경우도 집락을 취하여 확인시험한다.

(2) 확인시험
살모넬라 시험관법의 확인시험과 동일하게 실시한다.

1-8. 쉬겔라(Shigella)

[ 제1법 : 시험관법]

가. 배지
(1) 3배 농후 셀레나이트 액체증균배지
살모넬라 증균배지와 동일하다.

(2) XLD(자이로즈 라이신 데속시콜레이트) 한천 선택배지(추정시험용)

위 성분을 1ℓ의 물에 넣고 완전용해 될 때까지 가열한다. 55∼60℃까지 식힌 후 멸균된 페트리디쉬에 분주하여 고체화시킨다. 조제된 배지는 2∼8℃에서 보관한다.

나. 기구 및 장치
살모넬라 시험관법에서와 같은 것을 사용한다.

다. 시험

(1) 추정시험
증균과정은 살모넬라와 동일하다. 배양된 증균배지를 백금이로 취하여 XLD한천선택배지에 살모넬라와 같은 방식으로 획선 접종한 후 35℃에서 24시간 배양하여 붉은 색 집락이 형성되면 쉬겔라 추정시험의 양성으로 판정한다.

(2) 확인시험
(가) 생화학적 확인시험: 살모넬라의 확인시험과 동일하게 시험한다.
(나) 혈청학적 시험: 생화학적 확인시험에서 쉬겔라로 동정된 균주의 종을 알고자 할 경우는 쉬겔라 O항혈청 응집반응시험을 한다.

[제2법 : 막여과법 ]

가. 배지
(1) 셀레나이트 액체증균배지
(2) XLD(자이로즈 라이신 데속시콜레이트) 한천배지
추정시험용 배지시험관법의 배지와 동일하다.
나. 기구 및 장치
기구 및 장치는 대장균군 시험중 막여과법에서와 같은 것을 사용한다. .

다. 시험

(1) 추정시험
막여과장치를 설치하여 250ml의 시료를 여과한다. 장치의 멸균 및 시료액의 여과는 대장균군의 막여과법과 동일하게 시험한다. 여과막은 멸균가위로 잘라서 셀레나이트 증균배지가 7∼10ml 가량 들어있는 시험관에 넣어 37℃에서 18∼24시간 배양한다. 백금이를 이용하여 배양액을 취하여 XLD 한천배지위에 획선 접종한 다음 35℃에서 24시간 배양하여 붉은색 집락을 쉬겔라 추정시험의 양성으로 판정한다.

(2) 확인시험
쉬겔라 시험관법의 확인시험과 동일하게 시험한다.

1-9. 여시니아

(1) 배지
(가) CIN 한천 배지
여시니아선택 한천기본배지
효모엑스 2g
펩톤 17g
프로토오스 펩톤 3g
만니톨 20g
데속시콜린산나트륨 0.5g
염소산나트륨 0.5g

염화나트륨 1g
피르빈산나트륨 2g
황산마그네슘(6수염) 10mg
한천 13.5g
뉴트럴레드 30mg
크리스탈바이올렛 1mg
이르가산(irgasan) 4mg
물 1ℓ
최종 pH 7.4±0.2
CN여시니아 항미생물 보충액
세프설로이딘(cefsulodin) 4mg
노보바이오신(novobiocin) 2.5mg
물 10ml
여시니아선택 한천기본배지를 121℃에서 15분간 고압멸균한 후 45∼50℃로 식혀 CN여시니아 항미생물보충액(제조하여 사용할 경우에는 여과멸균한다)을 첨가한다.

(나) 메콩키 한천배지
펩톤 17g
프로테오스펩톤 3g
유당 10g
담즙염 No. 3 1.5g
염화나트륨 5g
한천 13.5g
뉴트럴레드 0.03g
크리스탈바이올렛 0.001g
물 1ℓ
최종 pH (25℃) 7.1±0.2

(다) mMC배지
메콩키 한천베이스에 D-쏘르비톨 10g/ℓ, 이르가산 4.0mg/ℓ, 노보바이오신 2.5mg/ℓ 첨가

(라) 0.288% 수산화칼륨용액
염화나트륨 8.5g
수산화칼륨 2.88g
물 1ℓ

(2) 기구 및 장치
(가) 기구 및 장치는 대장균군시험중 막여과법에서와 같은것을 사용한다.

(3) 시험
(가) 추정시험
약수 2ℓ를 멸균용기를 사용하여 채취한 후 즉시 시험한다. 즉시 시험할 수 없을 때는 냉장보관상태로 운반하여 조속한 시간내에 시험한다. 채취한 약수 1ℓ는 멸균된 여과장치를 이용하여 멸균상태의 여과지(membrane filter, 0.22㎛ pore size))를 통과시킨후 연속하여 0.288% 수산화칼륨용액 20∼30ml을 20초내에 완전히 여과 시킨후 이 여과지를 CIN배지에 그대로 올려놓고 25∼28℃에서 48시간 배양한다. 나머지 1ℓ는 동일한 과정을 거쳐서 메콩키배지 (혹은 mMC 배지)에서 배양한다. CIN배지에서는 점액성이 없고 중심부가 짙은 적색을 띠는 작은 집락을, 메콩키배지 (혹은 mMC)에서는 적색 혹은 점액성 집락은 피하고 작고(직경 1∼2mm), 편평한 무색 혹은 옅은 핑크색의 집락을 취하여 Brain Heart Infusion Agar에 옮긴다.

(나) 예비동정시험
TSI배지, 요소배지, 운동성 배지에 접종하여 예비실험을 한다. 예비실험에서 여시니아균의 특성을 나타내지 않는 집락은 여시니아균 음성으로 판정하고 여시니아균의 특성을 지닌 분리 집락은 그람염색시 음성임을 확인한 후 생화학적 확인동정시험를 한다. TSI 배지에서 37℃, 24시간 배양시 Y. enterocolitica는 자당을 분해하여 밑면과 사면이 황변하고 Y. pseudotuberculosis는 사면은 황변하고 밑면이 황변하지 않고 적색으로 남는다. 가스 및 황화수소는 발생하지 않는다. 요소배지에서는 양성으로 붉은 색을 나타내며, 운동성시험은 두 개의 운동성 배지에 접종하여 각각 37℃와 25℃에 따로 배양하여 37℃에서는 운동성이 없고, 25℃에서는 운동성을 나타낸다.


(다) 확인동정시험
생화학동정시험은 다음의 <표 1>과 같이 실시하거나 API 20E Kit 또는 VITEK GNI card 등을 사용한다.

<표 1>. Distinguishing properties of Yersinia species

Characteristic
Y.pseudotubercurosis
Y. enterocoliticn
Ornithine decarboxylase
Urease
Voges-Proskauer test(25℃)
Indole production
ONPG
Aesculin hydrolysis
Carbohydrate, acid from:
Arabinose
Lactose
Maltose
Mannose
Raffinose
Salicin
Sorbitol
Sucrose
Trehalose
Xylose
Rhamnose
Cellobiose
Melibiose
Sorbose
-
+
-
-
+
+

+
-
+
+
-
+
-
-
+
+
+
-
+
+

+
+
+
d
+
-

+
(d)
+
+
-
-
+
+
+
(+)
-
+
-
-

※d : different reaction

2. 이화학적 시험
2-1. 일반시험

2-1-1. 경도(Hardness)

가. 시약
(1) 시안화칼륨용액
시안화칼륨 10g을 물에 녹여 100㎖로 한다.
(2) 염화마그네슘용액(0.01M)
염화마그네슘(6수염) 약 2.1g을 물에 녹여 1ℓ로 한다.
(3) 암모니아완충액
염화암모늄 67.5g을 암모니아수 570㎖에 녹이고 물을 넣어 1ℓ로 한다.
(4) EBT용액
에리오크롬블랙T 0.5g과 염산히드록실아민 4.5g을 에탄올에 녹여 100㎖로 한다.
(5) EDTA용액(0.1M)
에칠렌디아민4초산2나트륨(2수염)을 80℃에서 5시간 건조하고, 데시케이터에서 식힌 다음 3.722g을 물에 녹여 1ℓ로 한후 갈색병에 넣어 보존한다(이 용액 1㎖는 탄산칼슘으로서 1㎎을 함유하는 양에 상당한다).

나. 시험
(1) 검수 100㎖(탄산칼슘이 10㎎이하로 함유되도록 검수에 물을 넣어 100㎖로 한 것)를 삼각플라스크에 넣고, 시안화칼륨용액 수방울, 염화마그네슘용액 1㎖ 및 암모니아완충액 2㎖를 넣는다.
(2) EBT용액 수방울을 지시약으로 하여 EDTA용액(0.01M)으로 검액이 적자색으로 부터 청색이 될때까지 적정한다.
(3) 이때에 소비된 EDTA용액(0.01M)의 ㎖(a)로 부터 다음 식에 따라 검수에 함유된 탄산칼슘의 양으로서 경도(㎎/ℓ)를 구한다.

2-1-2. 과망간산칼륨소비량(Consumption of KMnO4)

가. 시약
(1) 묽은황산(1+2)
물 200㎖에 황산 100㎖를 저으면서 천천히 넣고 수욕상에서 온도를 높이면서 과망간산칼륨용액으로 과망간산칼륨의 엷은 홍색이 없어지지 아니할 때까지 한 방울씩 넣는다.
(2) 수산나트륨용액(0.01N)
150∼200℃에서 1∼1.5시간 건조시키고 데시케이터에서 식힌 수산나트륨 0.670g을 물에 녹여 1ℓ로 하여 갈색병에 보존하고, 만든 후 1개월내에 사용한다.
(3) 과망간산칼륨용액(0.01N)
과망간산칼륨 0.31g을 물에 녹여 1ℓ로 한 후 갈색병에 보존한다.
표정 : 제1단계로 물 100㎖를 수개의 비등석을 넣은 삼각플라스크에 넣고 이에 묽은황산(1+2) 5㎖와 과망간산칼륨용액(0.01N) 5㎖를 넣어 5분간 끓인 후 수산나트륨용액(0.01N) 10㎖를 넣어 탈색을 확인한 다음 과망간산칼륨용액(0.01N)으로 엷은 홍색이 없어지지 않고 남을 때까지 적정하며, 제2단계로 적정이 끝난 용액에 다시 묽은 황산(1+2) 5㎖와 과망간산칼륨용액(0.01N) 5㎖를 넣어 5분간 끓인 후 수산나트륨용액(0.01N) 10㎖를 넣고 과망간산칼륨용액(0.01N)으로 엷은 홍색이 없어지지 않고 남을 때까지 적정하고, 제2단계에서 소비된 과망간산칼륨용액(0.01N)의 ㎖(a)로 부터 다음 식에 따라 역가(f)를 구한다.

(4) 비등석
비등석은 과망간산칼륨을 소비하지 않는 것을 사용한다.

나. 시험
(1) 검수 100㎖를 미리 수개의 비등석을 넣은 삼각플라스크에 넣고 묽은황산(1+2) 5㎖와 과망간산칼륨용액(0.01N) 10㎖를 넣어 5분간 끓인 후 수산나트륨용액(0.01N) 10㎖를 넣어 탈색을 확인한 다음 곧 과망간산칼륨용액(0.01N)으로 엷은 홍색이 없어지지 않고 남을 때까지 적정한다.

(2) 소비된 과망간산칼륨용액(0.01N)의 ㎖수(a)로 부터 다음 식에 따라 과망간산칼륨소비량(㎎/ℓ)을 구한다.

b : 물을 사용하여 검수와 같은 방법으로 시험할때에 소비된 과망간산칼륨용액(0.01N)의 ㎖
f : "가"의 (3)에서 구한 과망간산칼륨용액(0.01N)의 역가

2-1-3. 냄새(Odor)

검수 100㎖를 용량 300㎖의 마개있는 삼각플라스크에 넣고 가볍게 마개를 하여 온도를 40∼50℃로 높이고 심하게 흔들어 섞은 후 뚜껑을 열면서 즉시 냄새를 맡을때 냄새(염소냄새는 제외한다)가 나서는 안된다.

2-1-4. 맛(Taste)

검수 100㎖를 비이커에 넣고 온도를 40∼50℃로 높인 후 맛을 볼 때 맛(염소맛은 제외한다)이 있으면 안된다.

2-1-5. 색도(Color)

가. 시약
(1) 색도표준원액
염화백금산칼륨 2.49g과 염화코발트(6수염) 2.00g을 염산 200㎖에 녹이고 물을 넣어 1ℓ로 한다(이 용액은 색도 1,000도에 상당한다).
(2) 색도표준용액
색도표준원액을 물로 10배 희석한다(이 용액은 색도 100도에 상당한다).

나. 기구
(1) 비색관
길이 약 37㎝의 마개있는 밑면이 평평한 무색 시험관으로서, 밑바닥으로부터 30㎝의 높이에 100㎖의 표시선이 있는 것을 사용한다.

다. 시험
(1) 분석
검수 100㎖를 비색관에 넣고 (2)에 따라 작성한 표준색도와 비교하여 검수의 색도를 구한다.
(2) 표준색도
색도표준용액 0∼20㎖를 단계적으로 비색관에 넣고 각각에 물을 넣어 100㎖로 한다.

2-1-6. 수소이온 농도(pH)

pH미터를 사용하여 유리전극법에 따라서 측정한다(단, 샘물 및 먹는샘물의 경우에는 유리탄산이 함유된 시료에 있어서 수소이온농도는 유리탄산을 제거한 후 시험한다)

가. pH미터의 구조
pH미터는 보통 유리전극 및 비교전극으로 된 검출부와 검출된 기전력에 해당하는 pH를 지시하는 지시부로 되어 있으며, 비대칭전위조정용(제로점 조정) 및 온도보정용 꼭지 또는 감도조정용 꼭지가 있는 것도 있다. pH미터는 다음 조작법에 따라 임의의 한 종류의 pH표준용액의 pH를 매회 검출부를 물로 잘 씻은 다음 5회 되풀이하여 측정했을때 그 재현성이 ±0.05이내의 것을 사용한다.

나. 조작법
(1) 유리전극을 미리 물에 수시간이상 담그어 두며, pH미터는 전원을 넣어 5분이상 지난 후에 사용한다.

(2) 검출부를 물로 씻은 다음 묻어있는 물은 여과지등으로 가볍게 닦아낸다.
(3) 한 점에서 조정을 하는 경우에는 온도조정용 꼭지를 pH표준용액의 온도와 일치시켜 검출부를 검수의 pH값에 가까운 pH표준용액에 담그고 2분이상 지난 후 pH미터의 지시가 그 온도에서의 pH표준용액의 pH값이 되도록 비대칭전위 조정용 꼭지를 써서 pH값을 일치시킨다.
(4) 다음에 검액의 pH값에 가까운 pH표준용액에 담그고 감도조정용 꼭지 또는 표준용액의 온도에 관계없이 온조조정용 꼭지를 써서 앞의 조작과 같이 조작한다.
(5) 이상의 조작이 끝나면 검출부를 물로 잘 씻은 다음 묻어있는 물을 여과지 등으로 가볍게 닦아낸 후 검액에 담그어 그 측정값을 읽는다.

* 주의 : pH의 구조 및 조작법은 pH미터에 따라 다르다. pH 11이상에서 알칼리성금속이온을 함유하는 액은 오차가 크므로 알칼리오차가 적은 전극을 쓰며 다시 필요한 보정을 한다. 검액의 온도는 pH표준용액의 온도와 동일한 것이 좋다.

2-1-7. 증발잔류물(Total Solids)

가. 시험

(1) 검수 100∼500㎖를 미리 105∼110℃에서 건조하고 데시케이터에서 식힌 후 무게를 단 증발접시에 넣고 수욕상에서 증발건조한다.
(2) 다음 이를 105∼110℃에서 2시간 건고하고 데시케이터에서 식힌 후 무게를 달아 (1)에서 구한 증발접시의 무게차(a)를 구하여 다음 식에 따라 검수중의 증발잔류물의 양(㎎/ℓ)을 산출한다.

2-1-8. 탁도(Turbidity) <'99. 2. 11 개정>

가. 시약
(1) 물
정제수(0.02NTU)를 사용한다.
(2) 황산히드라진용액
황산히드라진〔(NH2)2·H2SO4〕1.000g을 100㎖ 용량의 마개 있는 메스플라스크에 넣고 물을 넣어 100㎖로 한다.
(3) 헥사메틸렌테트라아민용액
헥사메틸렌테트라아민〔(CH2)6N4〕10.00g을 100㎖ 용량의 마개 있는 메스플라스크에 넣고 물을 넣어 100㎖로 한다.
(4) 탁도표준원액
황산히드라진용액 5.0㎖와 헥사메틸렌테트라아민용액 5.0㎖를 섞어 실온에서 24시간 방치한 다음 물을 넣어 100㎖로 한다(이 용액 1㎖는 탁도 400 NTU에 해당하며 1개월간 사용한다)
(5) 탁도표준용액
탁도표준원액을 잘 섞으면서 10.0㎖를 정확히 취하여 물로 정확히 10배 희석한다. 이 용액은 탁도 40 NTU에 상당하며, 쓸 때에 만든다. 시판되는 탁도표준용액(조제한 포르마진과 동등한 역가의 스티렌디비닐벤젠비드)을 사용 할 수 있다.

나. 기구
(1) 탁도계 : 광원부와 광전자식 검출기를 갖추고 있으며 검출한계가 0.02 NTU 이상인 NTU(Nephelometric Turbidity Units) 탁도계로서 광원인 텅그스텐필라멘트는 2,200∼3,000K 온도에서 작동하고 측정튜브내에서의 투사광과 산란광의 총 통과거리는 10cm를 넘지 않아야 하며, 검출기에 의해 빛을 흡수하는 각도는 투사광에 대하여 90±30。를 넘지 않아야 한다.
(2) 측정튜브 : 무색투명한 유리재질로서 튜브의 내외부가 긁히거나 부식되지 않아야 한다.

다. 시험
(1) 분석
(가) 탁도계의 보정
탁도표준용액을 증류수로 희석하여 각각 0.5, 1, 2, 3, 4, 5 NTU용액 100㎖씩을 조제한 다음 각각의 측정튜브에 넣어 탁도계를 보정한다.
(나) 측정
검수를 강하게 흔들어 섞고 공기방울이 없어질 때까지 가만히 둔 후 일정량을 취하여 측정튜브에 넣고 보정된 탁도계로 탁도를 측정한다.

2-2. 무기물질
2-2-1. 이온류
2-2-1-1. 불소(F ; Fluoride)

가. 시약
(1) 페놀프탈레인용액
시안의 검사에 쓰는 페놀프탈레인용액과 같다.
(2) 수산화나트륨용액
수산화나트륨 40g을 물에 녹여 1ℓ로 한다.
(3) 인산
(4) 과염소산
(5) 알리자린컴플렉손용액
알리자린컴플렉손(1,2-디히드록시안트라퀴노닐-3-메칠아민-N.N-2초산 0.385g을 가능한 한 소량의 수산화나트륨용액에 녹이고, 물 10㎖를 넣은 다음 용액의 색이 자색으로부터 적색이 될 때까지 염산(1+99)을 천천히 넣고, 다시 물을 넣어 100㎖로 한다.
(6) 질산란탄용액
질산란탄(6수염) 4.33g을 물에 녹여 1ℓ로 한다.
(7) 초산완충액
초산나트륨(3수염) 100g을 물 약 200㎖에 녹이고, 초산 약 11㎖를 넣어 잘 섞은 후 pH 5.2가 되도록 초산을 넣고, 다시 물을 넣어 1ℓ로 한다.
(8) 아세톤
(9) 불소표준원액
불화나트륨을 백금접시중에서 500∼550℃에서 40∼50분간 가열하고, 데시케이터내에서 식힌 다음 2.210g을 물에 녹여 1ℓ로 한후 폴리에칠렌병에 넣어 보존한다(이 용액 1㎖는 불소 1㎎을 함유한다).
(10) 불소표준용액
불소표준원액을 물로 100배 희석한 용액 100㎖에 물을 넣어 1ℓ로 하며, 쓸 때에 만든다(이 용액 1㎖는 불소 0.001㎎을 함유한다).

나. 기구 및 장치.

◈불소증류장치 :원칙적으로 다음 그림과 같다.

A:수증기발생용플라스크(용량 1ℓ)

B:증류플라스크(용량 300㎖)

C:연결관

D:냉각기

E:온도계

다. 시험

(1) 전처리
(가) 전처리는 검수 1ℓ중에 인산이온 3㎎이상 또는 알루미늄이온 1㎎이상을 함유하거나 색도가 20도이상인 경우에 한다.
(나) 검수 200㎖를 증발접시에 넣고, 페놀프탈레인용액 수방울을 지시약으로 하여, 액이 엷은 홍색이 될 때까지 수산화나트륨용액을 넣고 가열 농축한다. 액이 약 50㎖가 된후, 곧 소량의 물을 사용하여 비등석을 넣은 증류플라스크(B)에 씻어 넣는다.
(다) 이 액에 인산 약 1㎖와 과염소산 40㎖를 넣은 후 미리 물 약 250㎖와 수개의 비등석을 넣은 수증기발생용플라스크(A), 연결관(C) 및 냉각기(D)를 연결하고, 수증기발생용플라스크(A)와 증류플라스크(B)를 가열한다. 이때 연결관(C)의 코크를 열어 놓는다.
(라) 증류플라스크내의 온도가 140℃가 되면 곧 연결관(C)의 코크를 조작하여 천천히 수증기를 통과시켜 증류한다. 이때 증류온도는 140∼150℃로 유지하며, 증류플라스크를 가열하는 불꽃은 플라스크내의 액면이하의 부분에만 접촉되도록 한다.
(마) 유출액이 약 190㎖가 되면, 곧 증류를 그치고 유출액에 물을 넣어 200㎖로 하여, 이를 시험용액으로 한다.

(2) 분석
(가) 검수 20㎖(0.003∼0.02㎎의 불소를 함유하거나 같은 양의 불소를 함유하도록 검수에 물을 넣어 20㎖로 한 것)를 비색관에 넣고, 알리자린컴플렉손용액 1㎖, 초산완충액 5㎖, 질산란탄용액 1㎖ 및 아세톤 20㎖를 넣고 다시 물을 넣어 50㎖로 하여 잘 흔들어 섞은 후 60분 이상 둔다.
(나) 이 용액의 일부를 흡수셀(10㎜)에 넣고 광전분광광도계 또는 광전광도계를 사용하여 검수와 같은 방법으로 시험한 공시험액을 대조액으로 하여 파장 620nm 부근에서 흡광도를 측정하고 (3)에 따라 작성한 검량선으로 부터 시험용액 중의 불소의 양을 구하여, 검수중의 불소의 농도를 측정한다.
(다) 전처리를 한 경우에는 전처리에서 얻은 시험용액을 검수로 한다.

(3) 검량선의 작성
(가) 불소표준용액 0∼20㎖를 단계적으로 비색관에 넣고, 각각에 물을 넣어 20㎖로 하여, 이하 (2)와 같은 방법으로 시험하여 불소의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.
(나) 또한 검수를 전처리한 경우에는 불소표준용액 0∼20㎖를 단계적으로 증발접시에 넣고, 각각에 물을 넣어 200㎖로 하여 이하 (1) 및 (2)와 같은 방법으로 시험한다.

2-2-1-2. 시안(CN ; Cyanide)

가. 시약
(1) 아비산나트륨용액
아비산나트륨 0.5g을 물에 녹여 100㎖로 한다.

(2) 페놀프탈레인용액
페놀프탈레인 0.5g을 에탄올 50㎖에 녹이고 물을 넣어 100㎖로 한후 이 용액이 홍색을 나타낼 때까지 수산화나트륨용액을 넣는다.
(3) 황산용액(1+35)
물 350㎖에 황산 10㎖를 서서히 넣어 혼합한다.
(4) 초산아연용액
초산아연(2수염) 100g을 물에 녹여 1ℓ로 한다.
(5) 수산화나트륨용액
수산화나트륨 40g을 물에 녹여 1ℓ로 한다.
(6) 초산용액(1+9)
물 90㎖에 초산 10㎖를 넣어 혼합한다.
(7) 인산완충액
인산2수소칼륨 3.40g과 인산1수소나트륨(무수) 3.55g을 물에 녹여 1ℓ로 한다.
(8) 클로라민 T용액
클로라민T(3수염) 1.25g을 물에 녹여 100㎖로 하며, 쓸 때에 만든다.
(9) 피리딘·피라졸론혼합액
1-페닐-3-메칠-5-피라졸론 0.25g을 75℃로 가열한 물 100㎖에 녹이고(완전히 녹지 않아도 좋다), 실온으로 식힌 다음 비스(1-페닐-3-메칠-5-피라졸론) 0.02g을 피리딘 20㎖에 녹인 용액을 넣어 섞는다. 이 용액은 쓸 때에 만든다.
(10) 질산은용액(0.1N)
질산은 17.0g을 물에 녹여 1ℓ로 한 후 갈색병에 넣어 보관한다.
표정 : 염화나트륨(500∼600℃에서 1시간 가열하고 데시케이타에서 식힌것) 약 100㎎을 정밀히 달아 백색사기접시 또는 삼각플라스크(백색판 위에서 적정)에 넣고 물 약 100㎖를 넣어 녹이고 크롬산칼륨용액 0.2㎖를 지시약으로 하여 질산은용액(0.1N)으로 엷은 등색이 없어지지 않고 남을 때까지 적정하고 여기에 소비된 질산은용액(0.1N)의 ㎖(a)로 부터 다음 식에 따라 질산은용액(0.1N)의 역가(f)를 구한다.

f = {염화나트륨의 양(㎎)}/{(a-b)×5.844}

a : 소비된 질산은용액(0.1N)의 ㎖
b : 공시험할 때 소비된 질산은용액(0.1N)의 ㎖

(11) 파라디메칠아미노벤지리덴로다닌용액
파라디메칠아미노벤지리덴로다닌 0.02g을 아세톤 100㎖에 녹인다.
(12) 시안표준원액
(가) 시안화칼륨 2.51g을 물에 녹여 1ℓ로 하며 표준원액을 만들 때마다 다음 방법에 따라 이 용액에 함유된 시안의 농도를 측정한다.
(나) 이 용액 100㎖를 비이커에 넣고 수산화나트륨용액 0.5㎖를 넣은 후 파라디메칠아미노벤지리덴로다닌용액 0.5㎖를 지용액으로 하여 용액의 색이 황색에서 적색으로 될 때까지 질산은용액(0.1N)으로 적정하고, 이에 소비된 질산은용액(0.1N)의 ㎖수(a)로 부터 다음 식에 따라 용액에 함유된 시안의 양(㎎/㎖)을 구한다.

시안(㎎/㎖) = {a×f / 100} ×5.20

a : 소비된 질산은용액(0.1N)의 ㎖수
f : 질산은용액(0.1N)의 역가

(13) 시안표준용액
10㎎에 상당하는 시안을 함유한 시안표준원액에 물을 넣어 1ℓ로 한 용액 100㎖와 수산화나트륨용액 50㎖의 혼합액에 물을 넣어 1ℓ로 하며, 쓸 때에 만든다(이 용액 1㎖는 시안 0.001㎎을 함유한다).

나. 시험
(1) 전처리
(가) 검수 250㎖(0.0025∼0.05㎎의 시안을 함유하거나 같은 양의 시안을 함유하도록 검수에 물을 넣어 250㎖로 한 것)를 미리 수 개의 비등석을 넣은 증류플라스크에 넣고 페놀프탈레인용액 수방울을 지시약으로 하여 황산용액으로 중화한다.

(나) 이 용액에 초산아연용액 20㎖를 넣은 후 다시 황산용액 10㎖를 넣어 유출속도가 매분 2∼3㎖가 되도록 가열 증류한다.
(다) 유출액은 미리 수산화나트륨용액 30㎖를 넣은 용기에 냉각기의 끝이 잠기도록 하여 유출액이 약 180㎖가 되면 곧 증류를 그치고 냉각기를 씻은 다음 용기에 냉각기를 씻은 액을 넣어 다시 페놀프탈레인용액 수방울을 지시약으로 하여 초산용액으로 중화한 후 물을 넣어 250㎖로 하여 이를 시험용액으로 한다.

(2) 분석
(가) 전처리에서 얻어진 시험용액 20㎖를 비색관에 넣고 인산완충액 10㎖ 및 클로라민T용액 0.25㎖를 넣어 마개를 막고 흔들어 섞는다.
(나) 2∼3분간 둔 후 피리딘·피라졸론혼합액 15㎖를 넣어 잘 섞고 20∼30℃에서 약 50분간 둔다.

(다) 이 용액의 일부를 흡수셀(10㎜)에 넣고 광전분광광도계 또는 광전광도계를 사용하여 검수와 같은 방법으로 시험한 공시험액을 대조액으로 하여 파장 620㎚ 부근에서 흡광도를 측정하고 (3)에 따라 작성한 검량선으로부터 시험용액중의 시안의 양을 구하여 검수중의 시안의 농도를 측정한다. 이때 0.01㎎/ℓ미만은 검출되지 아니한 것으로 한다.

(3) 검량선의 작성
시안표준용액 0∼4㎖를 단계적으로 비색관에 넣고 각각에 물을 넣어 20㎖로 한후 이하 (2)와 같은 방법으로 시험하여 시안의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.

2-2-1-3. 암모니아성질소(NH3-N ; Ammonium Nitrogen)

가. 시약
(1) 페놀니트로프루지트나트륨용액
페놀 5g 및 니트로프루지트나트륨 25㎎을 물에 녹여 500㎖로 한다. 차고 어두운 곳에 보존하고 1개월내에 사용한다.

(2) 차아염소산나트륨용액
차아염소산나트륨(100/c)㎖ (c는 유효염소농도 %) 및 수산화나트륨 15g을 물에 녹여 1ℓ로 하며, 쓸 때에 만든다.
(3) 암모니아성질소표준원액
염화암모늄 0.3819g을 물에 녹여 1ℓ로 한다(이 용액 1㎖는 암모니아성질소 0.1㎎을 함유한다).
(4) 암모니아성질소표준용액
암모니아성질소표준원액을 물로 100배 희석하며, 쓸 때에 만든다(이 용액 1㎖는 암모니아성질소 0.001㎎을 함유한다).

나. 시험
(1) 분석
(가) 검수 10㎖(0.01㎎ 이하의 암모니아성질소를 함유하거나 같은 양의 암모니아성질소를 함유하도록 검수에 물을 넣어 10㎖로 한 것)를 마개있는 시험관에 넣고 페놀니트로프루지트나트륨용액 5㎖를 넣어, 마개를 한 다음 조용히 흔들어 섞는다.
(나) 이어서 차아염소산나트륨용액 5㎖를 넣어 다시 마개를 하고 조용히 흔들어 섞은 후 25∼30℃에서 60분간 둔다.
(다) 이 용액 일부를 흡수셀(10㎜)에 넣고 광전분광광도계 또는 광전광도계를 사용하여 검수와 같은 방법으로 시험한 공시험액을 대조액으로 하여 파장 640㎚ 부근에서 흡광도를 측정하고, (2)에 따라 작성한 검량선으로 부터 시험용액중의 암모니아성질소의 양을 구하여 검수중의 암모니아성질소의 농도를 측정한다.
(2) 검량선의 작성
암모니아성질소표준용액 0∼10㎖를 단계적으로 마개있는 시험관에 넣고, 물을 넣어 10㎖로 한다. 이하 (1)과 같이 시험하여 암모니아성질소의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.

2-2-1-4. 질산성질소(NO3-N ; Nitrate Nitrogen)

가. 시약
(1) 살리실산나트륨용액
살리실산나트륨 1g을 수산화나트륨용액(0.01N)에 녹여 100㎖로 한다.
(2) 염화나트륨용액
염화나트륨 0.2g을 물에 녹여 100㎖로 한다.
(3) 설파민산암모늄용액
설파민산암모늄 0.1g을 물에 녹여 100㎖로 한다.
(4) 수산화나트륨용액(2 5)
수산화나트륨 40g을 물에 녹여 100㎖로 한다.
(5) 질산성질소표준원액
미리 105∼110℃에서 4시간 건조하고, 데시게이터에서 식힌 질산칼륨 0.722g을 물에 녹여 1ℓ로 하고 클로로포름 2방울을 넣은 후 갈색병에 넣어 보존한다(이 용액 1㎖는 질산성질소 0.1㎎을 함유한다).
(6) 질산성질소표준용액
질산성질소표준원액을 물로 100배 희석하며, 쓸 때에 만든다(이 용액 1㎖는 질산성질소 0.001㎎을 함유한다).

나. 시험
(1) 분석
(가) 검수 적당량(0.001∼0.2㎎의 질산성질소를 함유한 것)을 100㎖의 비이커에 넣고 살리실산나트륨용액 1㎖, 염화나트륨용액 1㎖ 및 설파민산암모늄용액 1㎖를 넣어 수욕상에서 증발건고한다.
(나) 이를 식히고 황산 2㎖를 넣어 때때로 저어 섞으면서 10분간 둔 후(증발잔류물이 다량인 경우에는 수욕상에서 10분간 가열하고 식힌 후) 물 10㎖를 넣어 네슬러관에 옮긴다.
(다) 다시 이를 식히고 천천히 수산화나트륨용액(2 5) 10㎖를 넣은 후 물을 넣어 전량 25㎖로 한다.
(라) 이 용액 일부를 흡수셀(10㎜)에 넣고, 광전분광광도계 또는 광전광도계를 사용하여 검수와 같은 방법으로 시험한 공시험액을 대조액으로 하여, 파장 410㎚ 부근에서 흡광도를 측정하고 (2)에 따라 작성한 검량선으로 부터 시험용액중의 질산성질소의 양을 구하여 검수중의 질산성질소의 농도를 측정한다.
(2) 검량선의 작성
질산성질소표준용액 0∼20㎖를 단계적으로 비이커에 넣고, 이하(1)과 같이 시험하여 질산성질소의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.

2-2-1-5. 염소이온(Cl- ; Chloride)

가. 시약
(1) 크롬산칼륨용액
크롬산칼륨 50g을 물 약 200㎖에 녹이고, 적색침전이 생길 때까지 질산은 용액을 넣어 여과한 후 여과액에 물을 넣어 1ℓ로 한다.

(2) 질산은용액(0.01N)
질산은 1.7g을 물에 녹여 1ℓ로 한 후 갈색병에 보존한다.
표정 : 염화나트륨(0.01N) 25㎖를 백색사기접시 또는 삼각플라스크(백색판위에서 적정)에 넣고, 크롬산칼륨용액 0.2㎖를 지시약으로 하여 질산은용액(0.01N)으로 엷은 등색이 없어지지 않고 남을 때까지 적정하고 이에 소비된 질산은용액(0.01N)의 ㎖(a)로 부터 다음 식에 따라 질산은용액(0.01N)의 역가(f)를 구한다.

f= 25 / (a-b)

a : 소비된 질산은용액(0.01N)의 ㎖
b : 염화나트륨용액 대신 물을 사용하여 위와 같은 방법으로 공시험할때 소비된 질산은용액(0.01N)의 ㎖

(3) 질산은용액
질산은 5g을 물에 녹여 100㎖로 한다.

(4) 염화나트륨용액(0.01N)
염화나트륨(500∼600℃에서 1시간 가열하고 데시케이터에서 식힌 것) 0.5844g을 물에 녹여 1ℓ로 한다.

나. 시험
(1) 검수 100㎖를 백색사기접시 또는 삼각플라스크(백색판위에서 적정)에 넣고, 크롬산칼륨용액 0.5㎖를 넣은 후, 액이 엷은 등색이 될 때까지 질산은용액(0.01N)으로 적정한다.

(2) 이에 소비된 질산은용액(0.01N)의 ㎖(a)로 부터 다음식에 따라 검수에 함유된 염소이온의 양(㎎/ℓ)을 구한다.

염소이온(㎎/ℓ) =(a-b) × f × 1,000 / 100 × 0.355

a : 소비된 질산은용액(0.01N)의 ㎖
b : 물을 사용하여 검수와 같은 방법으로 공시험할 때에 소비된 질산은용액(0.01N)의 ㎖
f : "가"의 (2)에서 구한 질산은용액(0.01N)의 역가

2-2-1-6. 황산이온(SO4+ ; Sulfate)

가. 시약
⑴ 황산이온표준용액
105℃에서 건조한 황산칼륨 0.9071g을 정확히 달아 물에 녹여 1ℓ로 한다(이 용액 1㎖는 황산이온 0.5mg을 함유한다).
⑵ 염화마그네슘용액(0.01M)
경도의 검사에 쓰는 염화마그네슘용액(0.01M)과 같다.
⑶ 염화바륨용액(0.01M)
염화바륨(2수염) 약 2g을 물에 녹여 1ℓ로 한다.
⑷ 암모니아완충액
경도의 검사에 쓰는 암모니아완충액과 같다.
⑸ EBT용액
경도의 검사에 쓰는 EBT용액과 같다.
⑹ EDTA용액(0.01M)
경도의 검사에 쓰는 EDTA용액(0.01M)과 같다.
표정 : 삼각플라스크에 황산이온표준용액 10.0㎖, 물 40㎖ 및 염산용액(0.02N) 5㎖를 넣고 끓이면서 염화바륨용액(0.01M) 10.0㎖를 넣어 수분간 끓이고 속히 식힌 다음 암모니아완충액 5㎖ 및 EBT용액 3방울을 넣은 후 곧 EDTA용액(0.01M)으로 적정하고, 종말점 부근에서 염화마그네슘용액(0.01M) 2.0㎖를 넣은 후 계속 적정하여 이에 소비된 EDTA용액(0.01M)의 ㎖(a)를 구하여 다음식에 따라 EDTA(0.01M)의 역가(f)를 구한다.

f = 5 /{(b-a) × 0.96}

a : 소비된 EDTA용액(0.01M)의 ㎖
b : 물을 사용하여 위와 같은 방법으로 시험할 때 소비된 EDTA용액 (0.01M)의 ㎖

 

나. 기구 및 장치
이온교환수지관 : 원칙적으로 다음과 같이 만든다.

양이온교환수지(Amberite IR-120)를 약 10배량의 염산용액(5N)에 담근다. 이어서 염소이온이 완전히 제거될때까지 물로 씻는다.
이 수지를 유리칼럼에 주입하여 약 12㎝의 수지층을 만든다. 이 때 수지층의 위에는 항상 소량의 물층이 남도록 한다. 이 수지층의 이온교환능력은 검수의 수질에 따라 다르지만 일반 먹는물에서는 약 3ℓ를 연속해서 사용할 수 있다. 만일 이 수지층을 통과시킨 유출액 10㎖를 시험관에 취하여 수산화나트륨(5N) 1방울과 NN희석분말을 넣을 때 적색이 나타날 때는 이 수지를 재생시켜야 한다.

다. 시험
⑴ 전처리
검수를 취하여 1분에 5㎖의 속도로 이온교환수지층을 통과시켜 처음 유출액 20㎖는 버리고 그 후의 유출액 50∼100㎖를 취하여 시험용액으로 한다.

⑵ 분석
(가) 검수 50㎖(1∼9mg의 황산이온을 함유하거나 같은양의 황산이온을 함유하도록 검수에 물을 넣어 50㎖로 한 것)를 삼각플라스크에 넣고 10% 염산 1∼2방울을 넣은 다음 끓이면서 염화바륨용액(0.01M) 10.0㎖를 넣어 수초간 끓인 후 식히고 암모니아완충액 5㎖ 및 EBT용액 3방울을 넣어 곧 EDTA용액(0.01M)으로 적정한다.

(나) 종말점 가까이서(용액의 색이 적자색에서 청색으로 변할 때) 염화마그네슘용액(0.01M)을 정확히 2.0㎖ 넣고 다시 용액의 색이 청색으로 변할 때 까지 적정한다.
(다) 이에 소비된 EDTA용액(0.01M)의 ㎖(c)를 구하여 다음 식에 따라 검수에 함유된 황산이온의 양(mg/ℓ)을 산출한다.

황산이온(㎎/ℓ) = 0.96 ×(b-c) × f × 1,000 / 50

b : 물을 사용하여 검수와 같은 방법으로 시험할 때 소비된 EDTA용액(0.01M)의 ㎖
C : 소비된 EDTA용액(0.01M)의 ㎖
f : EDTA용액(0.01M)의 역가


2-2-2. 금속류

2-2-2-1. 납(Pb ; Lead)

가. 시약
(1) 질산
(2) 구연산암모늄용액
구연산암모늄(원자흡광분석용) 25g을 물에 녹여 100㎖로 한다.
(3) 브롬치몰블루용액
브롬치몰블루 0.1g을 에탄올 50㎖와 물 50㎖의 혼합액에 녹인다.
(4) 암모니아수
(5) 메칠이소부칠케톤
(6) 디에칠디치오카르바민산나트륨용액
디에칠디치오카르바민산나트륨 5g을 물에 녹여 100㎖로 한다.
(7) 납표준원액
질산납 1.599g을 뮭은질산(1→10) 100㎖에 녹이고 물을 넣어 1ℓ로 한다(이 용액 1㎖는 납1㎎을 함유한다).
(8) 납표준용액
납표준원액을 물로 100배 희석하며, 쓸 때에 만든다(이 용액 1㎖는 납 0.01㎎을 함유한다).

나. 시험
(1) 전처리
(가) 검수 500㎖(0.005∼0.25㎎의 납을 함유한 것 또는 같은 양의 납을 함유하도록 검수에 물을 넣어 500㎖로 한 것을 말한다)를 비이커에 넣고 질산 5㎖(미리 시료에 넣은 질산을 포함한다)를 넣어 조용히 가열 농축한다.
(나) 액량이 약 50㎖가 되면 곧 가열을 그치고 식힌 후, 이 용액을 분액깔때기에 취한다.
(다) 이에 구연산암모늄용액 2㎖를 넣고 브롬치몰블루용액 수방울을 지시약으로 하여 액의 색이 황색으로부터 녹색으로 될 때까지 암모니아수를 넣어 중화한다.
(라) 다음 디에칠디치오카르바민산나트륨용액 10㎖를 넣고 흔들어 섞어 수분간 둔 후, 메칠이소부칠케톤 10㎖를 넣고 심하게 흔들어 섞은 다음 메칠이소부칠케톤층을 취하여 이를 시험용액으로 한다.

(2) 분석
전처리에서 얻은 시험용액을 동의 분석에서와 같은 방법으로 시험하되, 이 경우 "동중공음극램프" 대신 "납중공음극램프"를 쓰며, 파장 "324.7nm"를 "283.3nm"로 하여 측정한다.

(3) 검량선의 작성
납 표준용액 0∼10㎖를 단계적으로 분액깔대기에 넣고, 각각에 물을 넣어 50㎖로 한다. 이하 (1)(다만, 구연산암모늄용액을 넣은 시험 이후의 시험에 한한다) 및 (2)와 같은 방법으로 시험하여 납의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.


2-2-2-2. 비소(As ; Arsenic)

가. 시약
(1) 염산
(2) 요오드화칼륨용액
요오드화칼륨 15g을 물에 녹여 100㎖로 하며, 쓸 때에 만든다.
(3) 염화제1주석용액
염화제1주석(2수염) 40g을 염산 100㎖에 녹이며, 쓸 때에 만든다.
(4) 사상아연
지름이 1∼1.4㎜로서 비소를 함유하지 않은 것을 사용한다.
(5) 초산납용액
초산납(3수염) 10g에 초산 1방울을 넣고 물에 녹여 100㎖로 한다.
(6) 디에칠디치오카르바민산은용액
디에칠디치오카르바민산은 1g을 피리딘 200㎖에 녹인다.
(7) 비소표준원액
삼산화비소 1.320g을 수산화나트륨용액(20w/v%) 5㎖에 녹이고, 물 약 400㎖를 넣고 황산(1+19)으로 중화한 후 물을 넣어 1ℓ로 한다(이 용액 1㎖는 비소 1㎎을 함유한다).
(8) 비소표준용액
비소표준원액을 물로 100배 희석한 용액 100㎖에 물을 넣어 1ℓ로 하며, 쓸 때에 만든다(이 용액 1㎖는 비소 0.001㎎을 함유한다).

나. 기구 및 장치

비화수소 발생장치:다음 그림과 같다.

A : 비화수소발생병

B : 도 관

C : 흡수관
(단위 : ㎜)

다. 시험

(1) 전처리
검수 200㎖(0.001∼0.02㎎의 비소를 함유하거나, 같은 양의 비소를 함유하도록 검수에 물을 넣어 200㎖로 한 것)를 비이커에 넣고, 염산 5㎖를 넣어 검수가 약 30㎖로 될때까지 가열 농축하고, 식힌 다음 이를 시험용액으로 한다.

(2) 분석
(가) 전처리에서 얻은 시험용액을 비화수소 발생병(A)에 옮겨 넣고, 물을 넣어 약 40㎖로 한후, 요오드화칼륨용액 5㎖를 넣어 2분∼3분간 둔다.

(나) 다음 염화제1주석용액 1㎖를 넣어 섞고, 15분간 둔후, 사상아연 3g을 넣고 곧 비화수소 발생병(A)와 흡수관(C) (미리 디에칠디치오카르바민산은 용액을 넣어둔다)을 연결하여, 상온에서 1시간 수소가스를 발생시킨다. 이때 부수적으로 발생하는 비화수소는 디에칠디치오카르바민산은용액에 흡수시킨다.

(다) 이 흡수액의 일부를 흡수셀(10㎜)에 넣고 광전분광광도계 또는 광전광도계를 사용하여 디에칠디치오카르바민산은용액을 대조액으로 하여, 파장 525㎚부근에서 흡광도를 측정하고, (3)에 따라 작성한 검량선으로 부터 시험용액중의 비소의 양을 구하여 검수중의 비소의 농도를 측정한다.

(3) 검량선의 작성
비소표준액 0∼20㎖를 단계적으로 비화수소 발생병에 넣고, 각각에 염산 5㎖와 물을 넣어 약 40㎖로 한다. 이하(2) (다만, 요오드화칼륨용액을 넣은 후의 시험에 한한다)와 같은 방법으로 시험하여 비소의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.

2-2-2-3. 세레늄(Se ; Selenium)

가. 시약
(1) 염산 : 세레늄 분석용
(2) 아연말정제
무비소아연말 50g에 접착제 5g을 배합하고 물 7㎖를 넣어 갠 다음 정제 성형기에 가득 채우고 정제를 만든 다음 80℃에 10분간 건조한 정제(1개가 약 0.5g정도)를 사용하거나 무비소아연말 1g을 차광지에 쌓아 사용한다.
(3) 세레늄표준원액
이산화세레늄(SeO2) 1.405g을 물에 녹여 1ℓ로 한다(이 용액 1㎖는 세레늄 1㎎을 함유한다).
(4) 세레늄표준용액
세레늄표준원액을 물로 100배 희석한 용액 10㎖에 물을 넣어 1ℓ로 하며, 쓸 때에 만든다(이 용액 1㎖는 세레늄 0.0001㎎을 함유한다).

나. 기구 및 장치
(1) 원자흡광광도계
(2) 수소화세레늄 발생장치

다. 시험
(1) 검수 20㎖(0.0001∼0.001㎎의 세레늄을 함유하거나 같은 양의 세레늄을 함유하도록 검수에 물을 넣어 20㎖로 한 것)를 수소화세레늄 발생장치의 반응용기에 취하고 염산 10㎖를 넣고 약 15분간 방치한다.
(2) 이 장치를 원자흡광광도계에 연결하고 4방향 코크를 조작하여 아연말정제 1개를 신속히 시험용액 중에 넣고 마그네틱스티러로 저어주어 수소화세레늄을 발생시킨다. 발생한 수소화세레늄을 아르곤(또는 질소)-수소불꽃에 도입하여 파장 196.0㎚에서 흡광도를 측정한다.

라. 검량선의 작성
세레늄 표준용액 0∼10㎖를 단계적으로 수소화세레늄의 반응용기에 취하고 각각에 염산 10㎖ 및 물을 넣어 약 30㎖로 하고, 이하 다. 시험과 같은 방법으로 시험하여 세레늄의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.

2-2-2-4. 수은(Hg ; Mercury)

가. 시약
(1) 황산
(2) 질산
(3) 과망간산칼륨용액
과망간산칼륨 50g을 물에 녹여 1ℓ로 하고 여과한다.
(4) 염산히드록실아민용액
염산히드록실아민 10g을 물에 녹여 100㎖로 한다.
(5) 염화제1주석용액
염화제1주석(2수염) 10g을 묽은 황산(1→20) 60㎖에 넣고, 저으면서 가열용해한 후 식힌 다음 질소가스를 통과시켜 용액중의 수은을 제거하고 물을 넣어 100㎖로 하며, 쓸 때에 만든다.
(6) 수은표준원액
염화제2수은 0.135g을 묽은질산(1→10) 100㎖에 녹이고 물을 넣어 1ℓ로 한다.
(7) 수은표준용액
수은표준원액을 물로 100배 희석한 용액 100㎖에 질산 1㎖ 및 물을 넣어 1ℓ로 하며, 쓸 때에 만든다(이 용액 1㎖는 수은 0.001㎎을 함유한다).

나. 기구 및 장치
(1) 환원플라스크
환류냉각기가 부착된 용량 350㎖의 삼각플라스크로 용량 250㎖를 표시하는 선이 그어진 것을 사용한다.
(2) 원자흡광광도계
(3) 흡수셀
유리제 또는 염화비닐제의 원통(길이 100㎜)의 양끝에 석영유리창을 장치한 것을 사용한다.

다. 시험

(1) 전처리
(가) 검수 200㎖(0.0001∼0.002㎎의 수은을 함유하거나 같은 양의 수은을 함유하도록 물을 넣어 200㎖로 한 것)를 환원플라스크에 넣고 황산 10㎖와 질산 5㎖를 넣어 잘 섞는다.
(나) 다음에 과망간산칼륨용액 20㎖를 넣어 흔들어 섞고, 환류냉각기를 부착한 후 약 95℃의 수욕상에 환원플라스크를 담그고 2시간 가열한다.
(다) 식힌 후 환류냉각기를 제거하고 염산히드록실아민용액 8㎖를 넣고 흔들어 과잉의 과망간산이온을 환원한 후 250㎖의 표시선까지 물을 넣어 이를 시험용액으로 한다.

(2) 분석
(가) 원자흡광광도계의 광원램프(수은중곡음극램프 또는 수은램프)를 켜고 다이야후람펌프의 통기량을 적량으로 조정한다.
(나) 전처리에서 얻어진 시험용액에 염화제1주석용액 10㎖를 넣고 곧 통기장치에 연결한 후 다이야후람펌프를 작동시켜서 발생하는 수은증기를 흡수셀에 보낸다.
(다) 파장 253.7㎚에서 흡광도가 일정치가 된 때에 측정하고 (3)에 따라 작성한 검량선으로 부터 시험용액중의 수은의 양을 구하여 검수중의 수은의 농도를 측정한다. 이때 0.001㎎/ℓ 이하는 검출되지 아니한 것으로 한다.

(3) 검량선의 작성
수은표준용액 0∼20㎖를 단계적으로 환원플라스크에 넣어 각각 물을 넣어 200㎖로 한다. 이하 (1) 및 (2)와 같은 방법으로 시험하여 수은의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.

2-2-2-5. 6가 크롬(Cr+6 ; Hexachromium)

가. 시약
(1) 디페닐카르바지드용액
디페닐카르바지드 0.1g을 에탄올 50㎖에 녹이고 다시 황산(1+9) 200㎖를 넣는다.
(2) 6가크롬표준원액
중크롬산칼륨 2.829g을 묽은질산(1→10) 100㎖에 녹이고 다시 물을 넣어 1ℓ로 한다(이 용액 1㎖는 6가크롬 1㎎을 함유한다).
(3) 6가크롬표준용액
6가크롬표준원액을 물로 100배 희석한 용액 100㎖에 물을 넣어 1ℓ로 하며, 쓸 때에 만든다(이 용액 1㎖는 6가크롬 0.001㎎을 함유한다).

나. 시험
(1) 분석
(가) 검수 50㎖(0.001∼0.005㎎의 6가크롬을 함유하거나 같은 양의 6가크롬을 함유하도록 검수에 물을 넣어 50㎖로 한 것)를 비색관에 넣고 디페닐카르바지드용액 2.5㎖를 넣어 섞은 후 5분간 둔다.
(나) 이 용액 일부를 흡수셀(10㎜)에 넣고, 광전분광광도계 또는 광전광도계를 사용하여, 검수와 같은 방법으로 시험한 공시험액을 대조액으로 하여 파장 540㎚ 부근에서 흡광도를 측정하고 (2)에 따라 작성한 검량선으로 부터 검수중의 6가크롬의 농도를 측정한다.

(2) 검량선의 작성
6가크롬표준용액 0∼5㎖를 단계적으로 비색관에 넣고 각각에 물을 넣어 50㎖로 한다. 이하 (1)과 같은 방법으로 시험하여 6가크롬의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.

2-2-2-6. 카드뮴(Cd ; Cadmium)

가. 시약
(1) 질산
(2) 구연산암모늄용액
납의 검사에 쓰는 구연산암모늄용액과 같다
(3) 브롬치몰블루용액
납의 검사에 쓰는 브롬치몰블루용액과 같다.
(4) 암모니아수
(5) 디에칠디치오카르바민산나트륨용액
납의 검사에 쓰는 디에칠디치오카르바민산나트륨용액과 같다.
(6) 메칠이소부칠케톤
(7) 카드뮴표준원액
금속카드뮴(순도 99.9%이상의 것) 1.0g을 묽은질산(1→10) 100㎖에 가열하여 녹이고 물을 넣어 1ℓ로 한다(이 용액 1㎖는 카드뮴 1㎎을 함유한다).
(8) 카드뮴표준용액
카드뮴표준원액을 물로 100배 희석하며, 쓸 때에 만든다(이 용액 1㎖는 카드뮴 0.01㎎을 함유한다).

나. 시험
(1) 전처리
검수 200㎖(0.001∼0.03㎎의 카드뮴을 함유하거나 같은 양의 카드뮴을 함유하도록 검수에 물을 넣어 200㎖로 한 것)를 비이커에 넣고 이하 납의 전처리에서와 같은 방법으로 시험한다.
(2) 분석
전처리에서 얻은 시험용액을 동의 분석에서와 같은 방법으로 시험하되, 이 경우 "동중공음극램프" 대신 "카드뮴중공음극램프"를 쓰며 파장 "324.7㎚"를 "228.8㎚"로 하여 측정한다.
(3) 검량선의 작성
카드뮴표준용액 0∼3㎖를 단계적으로 분액깔대기에 넣고 각각에 물을 넣어 50㎖로 한다. 이하 (1)(다만, 구연산암모늄용액을 넣은 후의 시험에 한한다) 및 (2)와 같은 방법으로 시험하여 카드뮴의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.

2-2-2-7. 동(Cu ; Cooper)

가. 시약
(1) 질산
(2) 동표준원액
금속동(99.9%이상의 것) 1.0g을 묽은질산(1→10) 100㎖에 가열하여 녹이고 물을 넣어 1ℓ로 한다(이 용액 1㎖는 동 1㎎을 함유한다).
(3) 동표준용액
동표준원액을 물로 100배 희석하며 쓸 때에 만든다(이 용액 1㎖는 동 0.01㎎을 함유한다).

나. 시험
(1) 전처리
검수 200㎖(0.002∼0.08㎎의 동을 함유하거나 같은 양의 동을 함유하도록 검수에 물을 넣어 200㎖로 한 것)를 비이커에 넣고 질산 2㎖(미리 시료에 넣은 질산을 포함한다)를 넣어 액량이 약 10㎖가 될 때까지 약하게 가열농축하고, 메스플라스크에 옮긴 후 물을 넣어 20㎖로 하여 이를 시험용액으로 한다.

(2) 분석
(가) 원자흡광광도계의 광원램프(동중공음극램프)를 켜고 적당한 전류치로 조정한다
(나) 아세칠렌가스 또는 수소가스에 점화한 후 가스 및 압축공기의 유량을 조정한다.
(다) 전처리에서 얻은 시험용액을 불꽃 중에 분무하고 파장 324.7㎚에서 흡광도를 측정하여 (3)에 따라 작성한 검량선으로 부터 시험용액중의 동의 양을 구하여 검수중의 동의 농도를 측정한다.

(3) 검량선의 작성
동표준용액 0∼8㎖를 단계적으로 메스플라스크에 넣고 각각에 질산 2㎖와 물을 넣어 20㎖로 한다. 이하 (2)와 같은 방법으로 시험하여 동의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.

2-2-2-8. 아연(Zn ; Zinc)

가. 시약
(1) 질산
(2) 아연표준원액
금속아연(순도 99.9% 이상의 것) 1.0g을 묽은질산 (1→10) 100㎖에 가열하여 녹이고, 물을 넣어 1ℓ로 한다(이 용액 1㎖는 아연 1㎎을 함유한다).
(3) 아연표준용액
아연표준원액을 물로 100배 희석하며, 쓸 때에 만든다(이 용액 1㎖는 아연 0.01㎎을 함유한다).

나. 시험
(1) 전처리
검수 200㎖(0.001∼0.03㎎의 아연을 함유하거나 같은 양의 아연을 함유하도록 검수에 물을 넣어 200㎖로 한 것)를 비이커에 넣고 이하 동의 전처리에서와 같은 방법으로 시험한다.
(2) 분석
전처리에서 얻은 시험용액을 동의 분석에서와 같은 방법으로 시험하되, 이 경우 "동중공음극램프" 대신 "아연중공음극램프"를 쓰며, 파장 "324.7㎚"를 "213.8㎚"로 하여 측정한다.
(3) 검량선의 작성
아연표준용액 0∼3㎖를 단계적으로 메스플라스크에 넣고 각각에 질산 2㎖와 물을 넣어 20㎖로 한다. 이하(2)와 같은 방법으로 시험하여 아연의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.

2-2-2-9. 철(Fe ; Iron)

가. 시약
⑴ 염산
⑵ 염산히드록실아민용액
염산히드록실아민 10g을 물에 녹여 100㎖로 한다.
⑶ 1,10-페난쓰로린용액
1,10-페난쓰로린 염산염 0.12g을 물에 녹여 100㎖로 한 후 갈색병에 넣어 보존한다.
⑷ 초산완충액
초산암모늄 250g을 초산 700㎖에 녹이고 물을 넣어 1ℓ로 한다.
⑸ 철표준원액
황산제1철암모늄(6수염) 7.022g을 소량의 물에 녹이고 이에 염산 3㎖와 물을 넣어 1ℓ로 한다(이 용액 1㎖는 철 1mg을 함유한다).
⑹ 철표준용액
철표준원액을 물로 100배 희석하며, 쓸 때에 만든다(이 용액 1㎖는 철 0.01mg을 함유한다).

나. 시험
⑴ 전처리
검수 100㎖(0.005∼0.1mg의 철을 함유하거나, 같은 양의 철을 함유하도록 검수에 물을 넣어 100㎖로 한 것)를 비이커에 넣고, 염산 3㎖를 넣어 액량이 약 50㎖가 될 때 까지 가열 농축한 다음 실온에서 식히고 이를 시험용액으로 한다. 다만, 침전물이 있는 경우에는 여과한 후 사용한다.
⑵ 분석
전처리에서 얻은 시험용액을 비색관에 넣은 후 염산히드록실아민용액 1㎖, 1,10-페난쓰로린용액 5㎖ 및 초산완충액 20㎖를 넣고, 다시 물을 넣어 100㎖로 하여 30분간 둔다. 이 용액 일부를 흡수셀(10mm)에 넣고, 광전분광광도계 또는 광전광도계를 사용하여 검수와 같은 방법으로 시험한 공시험액을 대조액으로 하여 파장 510nm 부근에서 흡광도를 측정하고, ⑶에 따라 작성한 검량선으로부터 시험용액중의 철의 양을 구하여 검수중의 철의 농도를 측정한다.
⑶ 검량선의 작성
철표준용액 0∼10㎖를 단계적으로 비색관에 넣고, 각각에 염산 3㎖와 물을 넣어 약 50㎖로 한다. 이하 ⑵와 같은 방법으로 시험하여 철의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.

2-2-2-10. 망간(Mn ; Manganese)

가. 시약
⑴ 질산
⑵ 망간표준원액
금속망간(순도 99.9%이상의 것) 1.0g을 묽은질산 (1→10) 100㎖에 가열하여 녹이고, 물을 넣어 1ℓ로 한다(이 용액 1㎖는 망간 1mg을 함유한다).
⑶ 망간표준용액
망간표준원액을 물로 100배 희석하며, 쓸 때에 만든다(이 용액 1㎖는 망간 0.01mg을 함유한다).

나. 시험
⑴ 전처리
검수 200㎖(0.002∼0.1mg의 망간을 함유하거나, 같은 양의 망간을 함유하도록 검수에 물을 넣어 200㎖로 한 것)를 비이커에 넣고, 이하 동의 전처리에서와 같은 방법으로 시험한다.
⑵ 분석
전처리에서 얻은 시험용액을 동의 시험분석에서와 같은 방법으로 시험하되, 이 경우 “동중공음극램프” 대신 “망간중공음극램프”를 쓰며 파장 “324.7 nm”를 “279.5nm”로 하여 측정한다.
⑶ 검량선의 작성
망간표준용액 0∼10㎖를 단계적으로 메스플라스크에 넣고 각각에 질산 2㎖와 물을 넣어 20㎖로 한다. 이하 ⑵와 같은 방법으로 시험하여 망간의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.

2-2-2-11. 알루미늄(Al ; Aluminium)

[ 제1법 : 옥신법 ]

가. 시약
⑴ 염산
⑵ 클로로포름
⑶ 무수황산나트륨
⑷ 옥신용액
옥신(8-옥시퀴놀린) 2g을 초산 5㎖에 녹이고, 물을 넣어 200㎖로 한다.
⑸ 염산히드록실아민
염산히드록실아민 10g을 물에 녹여 100㎖로 한다.
⑹ 1,10-페난쓰로린용액
1,10-페난쓰로린염산염 0.12g을 물에 녹여 100㎖로 한 후 갈색병에 넣어 냉암소에 보존한다.
⑺ 초산나트륨용액
초산나트륨(3수염) 40g을 물에 녹여 100㎖로 한다.
⑻ 알루미늄표준원액
황산알루미늄칼륨(24수염) 1.758g을 물에 녹여 1ℓ로 한다(이 용액 1㎖는 알루미늄 0.1mg을 함유한다).
⑼ 알루미늄표준용액
알루미늄표준원액을 물로 10배 희석하며, 쓸때에 만든다(이 용액 1㎖는 알루미늄 0.01mg을 함유한다).

나. 시험
⑴ 전처리
검수 200㎖(0.002∼0.04mg의 알루미늄을 함유하거나, 같은 양의 알루미늄을 함유하도록 검수에 물을 넣어 200㎖로 한 것)를 비이커에 넣고, 염산(1+9) 4㎖(미리 시료에 넣은 염산을 포함한다)를 넣어 약 5분간 끓인 다음 염산히드록실아민용액 1㎖를 넣어 실온에서 식히고 이를 시험용액으로 한다.

⑵ 분석
(가) 전처리에서 얻은 시험용액을 분액깔때기에 옮긴 후 1,10-페난쓰로린용액 3㎖를 넣어 잘 흔들어 섞은 다음 옥신용액 2㎖, 초산나트륨용액 10㎖를 넣어 잘 흔들어 섞는다.
(나) 이어서 클로로포름 15㎖를 넣고 30초간 강하게 흔들어 섞은 다음 5분간 가만히 두었다가 클로로포름층을 무수황산나트륨 약 2g을 넣은 50㎖ 마개달린 시험관에 취하고 마개를 한 후 세게 흔들어 탈수한다.
(다) 이 용액 일부를 흡수셀(10mm)에 넣고 광전분광광도계 또는 광전광도계를 사용하여 검수와 같은 방법으로 시험한 공시험액을 대조액으로하여 파장 390nm 부근에서 흡광도를 측정하고 ⑶에 따라 작성한 검량선으로 부터 시험용액중의 알루미늄의 양을 구하여 검수중의 알루미늄의 농도를 측정한다.

⑶ 검량선의 작성
알루미늄표준용액 0∼4.0㎖를 단계적으로 비색관에 넣고 각각에 물을 넣어 200㎖로 한다. 이하 ⑴ 및 ⑵와 같은 방법으로 시험하여 알루미늄의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.

[제2법 : 원자흡광광도법 ]

가. 시약
⑴ 염산
⑵ 수산화나트륨
⑶ 암모니아수(10%)
⑷ 지르코늄용액
옥시염화지르코늄(8수염) 3.5g을 물에 녹여 100㎖로 한다.
⑸ 알루미늄표준원액
알루미늄 금속선(분석용) 1.0g을 물 100㎖와 수산화나트륨 5g의 혼합액에 녹이고, 물을 넣어 약 800㎖로 한 후 염산으로 중화하고, 0.1N염산을 넣어 1ℓ로 한다(이 용액 1㎖는 알루미늄 1mg을 함유한다).
⑹ 알루미늄표준용액
알루미늄표준원액을 물로 10배 희석하며 쓸 때에 만든다(이 용액 1㎖는 알루미늄 0.1mg을 함유한다).

나. 기구 및 장치
⑴ 원자흡광광도계
⑵ 아산화질소-아세틸렌 불꽃발생장치

다. 시험
⑴ 전처리
(가) 검수 200㎖(알루미늄을 0.24∼1.0mg정도 함유하거나 같은 양의 알루미늄을 함유하도록 검수에 물을 넣어 200㎖로 한 것)를 비이커에 넣고 염산 2㎖ 및 지르코늄용액 1㎖를 넣어 흔들어 섞는다.
(나) 이 용액을 암모니아수로 pH 9로 조정하여, 수산화지르코늄의 침전을 생성시킨다. 잘 섞어 방치하여 침전을 가라앉힌다.
(다) 여지 (5종A)로 여과하여 침전물을 분리한 후 물로 여지의 침전물을 씻는다.
(라) 침전물을 뜨거운 염산용액(2N) 20∼30㎖로 녹이고 식힌 후, 물로 50㎖로 하여 시험용액으로 한다.

⑵ 분석
전처리에서 얻은 시험용액을 불꽃중에 분무하고 동의 분석에서와 같은 방법으로 시험하되 이 경우 “동중공음극램프” 대신“알루미늄중공음극램프”를 쓰며 파장 “324.7nm”를 “309.3nm”로 하고 아산화질소-아세틸렌불꽃 발생장치를 써서 측정한다.

⑶ 검량선의 작성
알루미늄표준용액 0∼10㎖를 단계적으로 비이커에 넣고 각각에 염산 2㎖와 물을 넣어 200㎖로 한다. 이하 ⑴ 및 ⑵와 같은 방법으로 시험하여 알루미늄의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.

2-2-2-12. 보론(B)

[ 제1법 : 유도결합플라즈마-원자방출분광법 ]

가. 시약
(1) 정제수
(2) 질산
(3) 붕소표준원액
붕산 5.715g을 정제수에 녹여 1ℓ로 한다.
(4) 붕소표준용액
붕소표준원액 1㎖를 취하여 100㎖ 메스플라스크에 넣고 0.1N 질산으로 표선까지 채워 10ppm으로 만든다.

나. 시험
(1) 시험
(가) 시료의 전처리없이 직접 ICP로 분석한다.
(나) 조작조건
분석기기 : 유도결합플라즈마-원자방출분광법
캐리어 가스 : 아르곤 (Ar)
측정파장 : 249.773nm

(2) 검량선의 작성
붕소표준용액을 단계적으로 1∼10㎖ 취하여 각각에 정제수를 넣어 100㎖로 하여 (1)과 같은 방법으로 시험하여 붕소와 흡광도와의 관계를 구한다.

[ 제2법 : 흡광광도법 ]

가. 시약
⑴ 석회유(2w/v%)
소석회 2g을 정제수에 녹여 100㎖로 하며, 유상으로 한다.
⑵ 묽은염산(1+3)
⑶ 수산용액
수산(2수염) 50g을 아세톤 450㎖에 녹이고 여과한다. 2주일 이내에 사용한다.
⑷ 쿠크민용액
쿠크민 0.1g을 에탄올(95v/v%) 400㎖에 녹이고 여과하여 갈색병에 넣어 보존한다. 2주일 이내에 사용한다.
⑸ 붕소표준원액
붕산(H3BO3) 5.715g을 메스플라스크에 넣고 정제수를 넣어 1ℓ로 한다
⑹ 붕소표준용액
붕소표준원액 5㎖를 500㎖메스플라스크에 넣고, 정제수로 표선까지 채운다. 이 용액은 사용할 때마다 조제한다.

나. 기구 및 장치
⑴광전분광광도계

다. 시험조작
⑴ 전처리
검수 100㎖를 300㎖자제접시에 취하고 석회유 0.5㎖를 넣어 알칼리성으로 하고, 증발건고한다. 식힌 후 잔류물에 묽은염산(1+3) 1㎖ 및 수산용액 5㎖를 넣어 충분히 혼화하고, 다시 쿠크민용액 2㎖를 넣고 충분히 혼화한다. 이것을 55±3℃의 수욕상에서 증발건조시키고, 다시 30분간 수욕상에서 건조한다. 건조물을 아세톤 25㎖로 녹이고 여과한다. 여액을 50㎖ 메스플라스크에 옮기고 여지 및 자제접시를 아세톤으로 잘 씻고, 씻은 액도 메스플라스크에 합친 다음 아세톤을 넣어 전량 50㎖로 하여 시험용액으로 한다.
⑵ 분석
시험용액의 일부를 흡수셀(10mm)에 넣고 광전분광광도계를 사용하여 검수와 같은 방법으로 시험한 공시험액을 대조액으로하여 파장 540nm 부근에서 흡광도를 측정하고 ⑶에 따라 작성한 검량선으로부터 검수중의 붕소의 농도를 측정한다.
⑶ 검량선 작성
붕소표준용액 0∼1㎖를 단계적으로 수개의 300㎖자제접시에 취하고 각각에 정제수를 넣어 100㎖로 한다. 이하 ⑴ 및 ⑵와 같은 방법으로 시험하여 흡광도를 측정하고, 붕소의 양과 흡광도와의 관계를 구한다.